盐芥和拟南芥蜡代谢对比分析及盐芥ehkcr1基因的初步研究.pdf

摘要 表皮蜡质是覆盖在植物最外层的一类包括脂肪酸、烷烃、醇、醛、 酮及其衍生物等有机混合物的总称，对外界环境因子的胁迫响应敏 感。目前为止，国内外对蜡质的组分、合成及分泌途径、参与蜡质途 径的相关基因等进行了深入的研究。大量的研究证实了逆境条件下， 植物可通过改变表皮蜡质结构形态、含量或化学组分，从而有效地减 少不利环境造成的危害，但在适应极端环境的盐芥中未见相关报道。 盐芥作为拟南芥的近缘物种，有着更强的抗逆性及明显可见的表皮蜡 质，是研究蜡质代谢的理想材料。本实验探讨了非生物逆境条件下盐 芥表面蜡质代谢变化情况，并与拟南芥进行了对比分析。为了对盐芥 在适应逆境时，蜡质合成所发生的分子机制的深入了解，本实验还克 隆了一个蜡质合成相关的B．酮脂酰．CoA还原酶基因EhKCRl，并进 行了转基因的初步研究。 以拟南芥和山东生态型盐芥为实验材料，经50 ABA、200mM laM NaCI、4℃和自然干旱胁迫一周后分别观察其生长状况并测定叶面蜡 质含量。结果表明，经胁迫后拟南芥和盐芥均有发育迟缓、叶片黄化 萎焉等不同程度形态变化；盐芥未处理叶面蜡质总量明显较高，大约 为拟南芥叶面蜡质的3．0倍，这源于盐芥蜡质中存在有大量的脂肪酸， 约占总蜡质含量的87％，其中C24含量最高；拟南芥蜡质组分中则以 烷烃为主，约占总蜡质含量的80％，其中C29、C3l、和C33含量最多。 4种不同非生物胁迫下拟南芥叶表皮蜡质含量均显著增加，增加幅度 TT 蜡质含量与对照相比差异显著，分别增加了165．3％和243．2％，而50 mM ABA和200NaCl处理后，增加不明显，仅为18．O％和23．8％。 laM 研究发现，不同非生物逆境胁迫条件下，盐芥和拟南芥中蜡质总含量 及各组分均有不同程度的增加，而且主要是烷烃含量的增加来更好地 适应逆境环境。表明盐芥的极强抗逆性与其特定的蜡质组成有着重要 关系，这些特定含量的蜡质组分可为作物的抗逆育种提供新型的分子 标记。 采用电子克隆及RT—PCR的方法从山东生态型盐芥中获得了一 长1152 bp，含954 bp开放阅读框架，编码318个氨基酸，GenBank 守结构域、疏水性和二级结构等进行了分析。EhKCRl蛋白质具有 基因与来源于拟南芥和油菜的KCRl亲缘关系最近，与单子叶植物来 源的KCRl亲缘关系较远。实验还成功构建了EhKCRl的植物表达载 体100一KCR(含EhKCRl正义基因)和100-antisenseKCR(含EhKCRI 反义基因)。利用花序浸染法获得了28株Tl代转100一KCR拟南芥和 KCR盐芥。有关EhKCRl转基因纯合子株 18株Tl代转100。antisense 系的抗性测定等后续工作还在进行中。 关键词：盐芥；拟南芥；蜡质；非生物胁迫；EhKCRl基因 TTT AB STRACT waxcovertheoutersurfaceofland Epicuticular plants，which consists of predominantlylong—chainhydrocarbon alkanes，primary alcohols，aldehydes，secondary otherderived issensitivetothestress ofthe compounds．It response extemalenvironmentfactors．So andsecretion of f