转bt基因稻谷小鼠健康的安全性评价.pdfVIP

中文摘要 本论文通过五个试验研究转Bt(Bacillus 谷中所表达的crylAc杀虫蛋白对小鼠的体内血清生化指标、胚胎生 长发育、脏器指数、小鼠小肠mtDNA突变的影响；以及外源基因和 外源蛋白质在小鼠体内残留程度与转基因稻谷的潜在致敏性，旨在 为评价转Bt基因稻谷的食用安全性提供科学依据，并获得了如下主 要结果： 试验l转Bt基因稻谷对小鼠血清生化指标和器官发育的影响 试验将80只6周的小鼠随机分成两个处理组，每个处理4个重 复，每个重复10只小鼠(5只公鼠，5只母鼠)，对照组饲喂同一品 种的非转基因稻谷日粮(C组)，试验组饲喂转基因稻谷日粮(Bt组)。 试验期90d，90d时每个重复随机抽取5只小鼠，眼球静脉取血，测 定血常规血生化指标：取血后处死，测定重要器官指数：其中小肠、 肝脏、肺脏和脾脏做成显微切片观察病理变化，结果表明实验组和 对照组血常规血生化指标正常，重要器官指数未见显著差异，肝脏、 肺脏和脾脏切片未见明显病理变化，但小肠切片表明实验组小鼠小 肠腺细胞产生了病变性增生。 试验2转Bt基因稻谷对小鼠胚胎生长发育的影响 将试验一的雄雌大鼠按l：1合笼，每天对雌鼠进行阴道涂片检查， 以发现精子之日为妊娠0d，于妊娠20d处死孕鼠进行剖检。然后对妊 娠小鼠体重增加观察各组于妊娠的O、4、8、12、16、20d称重，观 察体重的变化。对妊娠小鼠生殖能力检查观察并记录胚胎称重、着 T 床数、活胎数、死胎数、吸收胎数。活胎逐一检查记录性别、体重、 身长、尾长及外观有无畸形。将每窝1／2胎仔用茜素红染色，检查骨 骼项目。将每窝I／2胎仔用Bouin氏液固定2周，用徒手切片法作内 脏检查。 结果表明转Bt基因稻谷对孕鼠孕期体重增长没有影响，活胎仔肉 眼外观检查结果表明，头部、四肢、尾、躯干、面部、腭、唇均无畸 形。用放大镜按顺序检查各脏器大小、形状及位置，Bt组和对照组均 未见异常。 试验3转Bt基因稻谷的致敏性生物信息学预测 用三维结构比较工具比对后发现，Bt毒素蛋白和多种常见的细 三维构象特征，都含有由多个疏水的和亲水亲脂Q一螺旋组成的Q一 螺旋束，其长度足以跨过双层脂膜，具有相似的穿孔机制。据此预 测转Bt基因稻谷具有致敏性可能，具体情况有待于进行实验研究。 试验4取食转Bt基因稻谷的小鼠小肠mtDNA突变的研究 12S 选定mtDNA的mtDNARNA和16SRNA全序列片段引物，共 果与线粒体基因库中的小鼠mtDNA序列对比，得到所有食用转Bt基 因稻谷小鼠小肠标本中一致性的2个有意义的点突变，造成了原来 --Lys)。对于实验结果中2个一致性突变，推测它们可能起到协同 作用，突变的积累使得线粒体功能出现异常，从而导致小鼠出现小肠 II 腺细胞病变性增生。 试验5转基因稻谷中外源基因和外源蛋白质在小鼠体内残留的检测 随着转基因植物在饲料中的应用，人们对转基因植物中重组DNA 及其表达的目的蛋白质是否会转移到动物产品中越来越关注。本试 验以转Bt基因的抗虫水稻的稻谷配成日粮饲喂小鼠，90d时随机抽 取5只，无菌条件下心脏取血，以肝素钠抗凝：处死，无菌条件下取 小鼠的肝脏、肾脏、脾脏、小肠、腿肌。采用一对crylAc基因特异 的引物，以转基因稻谷中的crylAc基因的229bp片段为PCR扩增 体系和扩增条件的阳性对照，以小鼠内源GAPDH基因340bp片段为 DNA提取效果阳性对照，对血液、肝脏、肾脏、脾脏、小肠、腿肌的 DNA进行PCR扩增，检测是否有crylAc基因229bp片段残留或转移， 结果未扩增出该基因的特异性片段。以转基因稻谷配制的小鼠日粮 为阳性对照，采用ELISA法检Nd,鼠粪便、肝脏、肾脏、脾脏、小 肠、和腿肌是否有由crylAc基因表达的抗虫蛋白的残留，结果表明 转基因稻谷日粮中的外源基因所表达的抗虫蛋白crylAc在体内被降 解，其小分子片段随粪便排出体外，最终并未在小鼠的内脏器官和 肌肉中累积。 综上所述，通过本文系列研究发现以转Bt基因稻谷作为小鼠饲 料，在实验期间，被饲喂90d的小鼠不仅未发现产生外观不安全和 不健康的性状，而且对小鼠亲代和子代的血清生化指标及其器官的 发育均无明显影响；也未发现转基因成分在小鼠体内会发生