《Tb3+与氧合血红蛋白反应动力学的停流荧光光度法研究》.pdfVIP

V01．19 高等学校化学学报 No．6 9 CHINESEUNIVERSITIES 1 9 8年6月 CHEMICAI。JOURNAI，OF 876～878 [研究简报] Tb3+与氧合血红蛋白反应动力学的停流荧光光度法研究“ 程驿 林华宽 王 夔 (南京大学化学系．南京，210093)(南开大学化学系，天津，300071)(北京医科大学药学院，北京，100083) 关键词稀土，氧合血红蛋白，动力学，停流荧光法 分类号0657．32 物由于其类Ca2^|生导致各种负面生物效应，包括影响心血管功能及溶血．然而有关稀土离子 与血红蛋白的研究工作国内外尚很少见报道．我们发现稀土离子能影响血红蛋白的载氧功 能[2]，并多次发现金属离子与生物大分子的作用是一个过程，包括金属离子的结合及后续变 化，其中重要的是构象及组装的变化．本文用停流荧光光度法在100ms的反应范围内研究了 Tb3+与人氧合血红蛋白快速反应动力学，证明了此反应为典型的二级反应，求得了反应速率 常数及活化参数．初步探讨了反应机理． 1实验部分 1．1 仪器与试剂RA一401型停流分光光度计(Union G一25 (Sigma公司)；氧化铽纯度99．9％．其它试剂均为分析纯． 1．2 mmoI／i。 实验方法人氧合血红蛋白(oxyHb)按文献口3方法分离纯制：用pH一7．4，5 7Iris缓冲液低渗溶血，离心所得上清液经Sephadex mmol／L Hb)，洗脱液为pH一7．4，20 定[4]．氧化铽溶于浓盐酸后，加热除去多余盐酸，并用二次蒸馏水稀释成氯化铽储备液，其 nm；发射波 度计测定oxyHb内源性荧光强度F随反应时问t的变化，荧光激发波长凡。为280 长九。为330nm；增益为0．02Y／FS；延迟为0；记录荧光强度乒1随时间的变化，按准一级反 应计算表观常数kos。(均取6次实验结果的平均值)． 2结果与讨论 2．1 Tb3+与oxyHb反应级数和速率常数oxyHb在280rim光激发下，其发射光谱(见图 1)有3个谱带：330nm为oxyHb球蛋白上色氨酸(Trp)的荧光；650 nm×2)；430～470 频发射(约为330 Flm的荧光发射的归属尚不清楚．静态荧光研究表明： Tb3+存在下，对血红蛋白中色氨酸残基的荧光影响最明显．故选取激发波长280nm，发射波 mol／L 长330 oxyHb 的反应荧光停流波迹曲线(F～f)[其一见图2(6)，其余略]．在100ms范围内为荧光猝灭曲 6．联系人；王夔．第一作者：程驿，男，31岁，博士研究生 收稿日期：1997—05—1 *国家自然科学基金(批准号资助课题． 万方数据万方数据 No．6 程驿等：Tb3+与氧合血红蛋白反应动力学的停流荧光光度法研究877 § 8 l 罨