人乳头瘤病毒L1 基因与丹毒丝菌SpaAN优势抗原表位序列的嵌合重组质粒构建及活鉴定.pdfVIP

生物技术通报 · · BIOTECHNOLOGY B ULLETIN 20 11 10 研究报告 年第 期 L1 SpaA-N 人乳头瘤病毒 基因与丹毒丝菌 优势抗原 表位序列的嵌合重组质粒构建及活性鉴定 庆格乐图 杨薇薇 晏鹏飞 苏幼红 李江伟 ， 830046 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室 乌鲁木齐 : A N- SpaA-N ， DNA ， 摘 要 为确定丹毒丝菌表面保护性抗原 的 末端 优势抗原表位 研发新型表位 嵌合疫苗 利用生 物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N B ， PCR 16 的优势 细胞抗原表位进行预测 以重叠 将优势表位插入人乳头瘤病毒 型的主要 HPV-16 L1 HI ， pcDNA3-HPV- L1- spaA 。 、 衣壳蛋白 环结构的编码序列中 构建获得重组嵌合质粒 Δ 该重组质粒经体内 外瞬时 ，RT-PCR 1 500 bp 。 ， GST- 转染后 均扩增获得了 左右的目的片段 免疫印迹试验显示 体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与 SpaA-N 重组蛋白免疫血清在56 kD 处产生特异性结合。ELISA 分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体 P ＜ 0. 01 ， 1∶ 1 000 。 ，pcDNA3-HPV-L1- spaA 1∶ 10 ， 抗体滴度为 此外 Δ 制备的抗血清至少可在 稀释度条件下 介导外源补体对 半数以上的菌体进行杀伤。 ， SpaA-N DNA ， 该研究表明 获得的 表位 嵌合疫苗具有免疫活性 为研发安全有效的丹毒丝菌新型 DNA 疫苗提供了一个新思路。 : SpaA-N HPV-16 L1 关键词 丹毒丝菌 表位预测 嵌合质粒 瞬时表达 杀菌活性 Construction and Active Identification of Recombinant Plasmid with Chimeric Human Papillomavirus Type 16 L1 Expressing an Epitope of Erysip elothrix rhusiop athiae SpaA-N Qinggeletu Yang Weiwei Yan Pengfei Su Youhong Li Jiangwei Key Laboratory of Molecular Biology ，Xinj iang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering ，College of Lif e Science and Technology ，Xinj iang University ，Urumqi 830046 Abstract : To comfirm the B cell epitope of N-terminal of surface protective antigen A SpaA-N from Erysip elothrix rhusiop athiae and develop an efficient DNA vaccine ，an experimental DNA plasmid was constructed based on the predicted B cell epitope derived from SpaA-N ，and then the predominant epitope was inserted into the coding sequence of human papillomavirus type 16 major capsid protein HPV-16 L1 HI loop by overlap PCR． pcDNA3-HPV- L1- spaA were transfected in vitro and in vivo ，the results of RT-PCR Δ showed that the 1 500 bp round products were amplified ，while Western blotting illustrated the total proteins of cells which transfected pcDNA3-HPV- L1- spaA plasmid can bound with mouse against GST-SpaA-N antiserum at 56 kD specific