血红素氧合酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用.pdfVIP

中文 摘 要 血红素氧合酶对大鼠肝脏缺血再灌注 损伤的保护作用 摘 要 目的 肝脏的缺血.再灌注(ischemiareperfusioninjury,IRI)是一 个临床常见的病理生理过程，出现在失血性休克、中毒性休 克、肝移植、肝切除等许多临床过程中。缺氧后，对器官恢 复血流灌注所形成的损伤，严重影响着休克后复苏的效果和 肝移植术后的肝脏生存率。因此，缺血再灌注损伤的研究， 对促进缺血后器官功能的恢复具有重要意义。 川」脏缺血再灌注损伤是一个复杂的多因素过程。氧自由 基(oxygenfreeradical,OFR)形成、钙超载、微循环衰竭 等都参与了这个复杂的过程。 血红素氧合酶 (hemeoxygenase,HO)是血红素降解的 起始酶和限速酶，能在体内分解血红素生成一氧化碳(carbon monoxide,CO),胆绿素(biliverdin)和游离铁(freeiron)。近 年来研究发现，HO及其代谢产物还参与了对抗氧化应激、 调节血管张力、信号传递、抗细胞增殖等多种生理过程，其 中HO在应激反应中表达，并对组织起着保护作用。 有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)是一个与氧化应激有关的重要通路，其中P38 在应激中起着重要的作用。研究P38与肝脏缺血再灌注损伤 及与HO-1的关系有助于阐明HO-I作用机制。 本研究旨在通过分别用血红素氧合酶-1(HO-1)的诱导剂 (heroin)和抑制剂((ZnPP)来研究血红素氧合酶一一氧化碳系 中文 摘 要 统对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响及机制。 方法 1模型的制备与分组 本研究以10%水合氯醛腹腔内注射麻醉大鼠后，取腹部 正中切口入腹，显露肝脏，分离供应肝左叶和中叶的肝动脉 和门静脉，用显微止血.夹夹住，45min后取出止血夹，造成 肝脏缺血再灌注损伤模型。将雄性Wistar大鼠随机分为假手 术组、缺血再灌注组、hemin组和ZnPP组。其中hemin组， 于手术前12h，腹腔内注射hemin20mg/kg，再进行缺血再灌 注:ZnPP组，于手术前3h和 16h，分2次腹腔内注射ZnPP 各lOumol/kg，然后进行缺血再灌注。 2生化指标测定 在再灌注Oh,4h,Sh,12h，取血浆，测定丙氨酸氨基 转移酶 (alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转 移酶 (aspartateaminotransferase,AST);取肝组织测定超氧 化物歧化酶 (superoxidedismutase,SOD)和丙二醛 (malondialdehyde,MDA)活性。 3月干脏组织学检查 采用石蜡切片染色。(1)HE染色。(2)免疫组织化学染色: 脱蜡至水，3%过氧化氢孵育30min。抗原热修复，即将切片 放入盛有抗原修复液 (构椽酸盐缓冲液)的容器中水浴，保 持容器内缓冲液温度92^-940C,15-25min，修复完毕后， 室温冷却。用正常山羊血清370C孵育30min。倾去后，滴加 一抗，4℃过夜。阴性对照用PBS代替一抗。滴加1:100稀 释的生物素标记的二抗，370C孵育30mine滴加 1:100稀 释的辣根酶标记的三抗，37C孵育30min。用3,3一二氨基苯 2 中文 摘 要 联胺 (DAB)显色，以自来水终止。复染后封片。 结果 1生化指标 缺血再灌注组与假手术组相比，在再灌注Oh,4h,8h, 12h各时R]点，可见 ALT,AST,MDA增高，SOD 降低 (P0.05-P0.01)。与缺血再灌注组相比，hemin组在再灌注 4,8,12hALT降低 (P0.05):再灌注4h,12h,AST减低 (P0.05);在再灌注4h,8h,12h,SOD增高(P0.05),MDA 水平降低((P0.05)。与缺血再灌注组相比，ZnPP组在再灌注 8h,12hALT增高