远程缺血预处理提高梗死后心肌募集移植干细胞能力实验的研究.pdf

目录 中文摘要……………………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………………．3 引 言……………………………………………………………………………5 第一部分…远程缺血预处理对梗死后心肌SDF．1表达的影响……………．．14 1．前言……………………………………………………………………………．．14 2．材料与方法……………………………………………………………………．．15 2．1实验动物………………………………………………………………………．15 2．2主要实验试剂…………………………………………………………………15 2．3主要实验设备……………………………………………………………．16 2．4动物模型………………………………………………………………………．17 2．5酶联免疫吸附检测血清细胞因子……………………………………………19 2．6聚合酶联反应检测SDF-1的转录表达……………………………………．2l 2．7免疫印迹检测SDF．1的蛋白表达………………………………………25 2．8统计分析方法………………………………………………………………．30 3．结果…………………………………………………………………………………3l 3．1实验模型结果…………………………………………………………………．31 3．2远程缺血预处理后血清中细胞因子早期升高………………………………．31 3．3远程缺血预处理后心肌SDF-1基因转录晚期升高………………………．．32 3．4远程缺血预处理后心肌SDF-1蛋白表达晚期升高…………………………．33 4．讨论………………………………………………………………………………．．34 5．结论……………………………………………………………………………………36 6．参考文献……………………………………………………………………………．．37 第二部分…远程缺血预处理提高梗死后心肌募集移植干细胞的疗效研究………。40 1．前言……………………………………………………………………………．．40 2．材料与方法…………………………………………………………………………42 2．1实验动物……………………………………………………………………．．42 2．2主要实验设备………………………………………………………………．42 2．3骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定…………………………………．．43 2．4骨髓间充质干细胞的标记及计数…………………………………………．44 2．5移植实验……………………………………………………………………．．46 2．6SDF．1／CXCR4阻断实验………………………………………………．．46 2．7免疫组化检测心脏中移植细胞……………………………………………47 2．8定量PCR检测心脏中移植细胞……………………………………………50 2．9左心室功能检测……………………………………………………………．．51 2．10统计分析方法…………………………………………………………．．52 3．结果……………………………………………………………………………．．53 3．1骨髓阅充质干细胞的表面抗原表达鉴定结果…………………………53 3．2骨髓问充质干细胞染色后计数结果……………………………………．53 3．3远程缺血预处理提高移植细胞在心内滞留率的免疫组化结果…………．．54 3．4远程缺血预处理提高移植细胞在心内滞留率的PCR检测结果…………．．55 3．5远程缺血预处理提高细胞移植治疗梗死心脏左室功能的结果……………57 3．6阻断SDF-1降低远程缺血预处理提高的细胞滞留率……………………．58 4．讨论…………………………………………………………………………………S9 5．结论…………………………………………………………………………………62 6．参考文献……………………………………………………………………………63 第三部分…文献综述………………………………………………………………68 综述l：基质细胞衍化因子．1在心梗治疗中的作用及意义………………………．．68 综述2：缺血处理在心脏保护中的研究．及应用………………………………………91 附录1