孕期酒精暴露对仔鼠视网膜发育细胞凋亡影响.pdf

摘要 当孕妇在妊娠期滥用酒精时，由于酒精可随血液通过胎盘屏障，除了容易导致 流产、死胎外，还可给胎儿在出生后造成一些不可逆的影响，导致各种生长障碍、面部 alcohol 畸形，尤其是对神经系统的发育危害最大，造成胎儿酒精综合症(Fetal syndrome， FAS)。在FAS中常出现斜眼、小眼畸形、先天性近视、弱视等一些视觉系统的疾病，而 这些疾病的发生大多数与视网膜的异常有关。本课题运用CSB／6J小鼠建立妊娠期酒精 暴露动物模型，以模拟胎儿酒精综合征的发生，来研究孕期酒精暴露对小鼠视网膜致畸、 细胞发育及凋亡等方面的影响，旨在为酒精所致的视觉系统疾病提供病因学研究的理论 基础。 目的：研究视网膜的正常发育和细胞分化过程，和酒精对视网膜细胞发育和凋亡方 面的影响以及对视网膜的致畸作用。 方法：利用C57BL／6J小鼠建立孕期酒精暴露模型，用HE染色和免疫荧光技术， 细胞在发育和凋亡方面的影响，以及酒精的对视网膜的致畸作用。 结果：l、视网膜的一般结构的发育：视网膜片层化形成以及水平细胞和双极细胞 的发育： (1)视网膜片层化过程： 小鼠刚出生即PO时视网膜仅分化出四层，包括神经节细胞层、内网层、成神经母 细胞层和色素上皮层： P7时在成神经母细胞层中间出现外网层，将其分为内颗粒层、 外颗粒层，此后外网层增宽，视锥视杆层出现，至P14小鼠睁眼时，视网膜十层结构基 本形成。表明视网膜形态学的发育程度与其功能上的完善程度有一致性。 (2)水平细胞和双极细胞的发育： 层，和胞体共同呈现出“丁字形结构，此后，伸入外网层的树突数量逐渐增多，直至 P14时树突和胞体共同呈现出扇形结构，至此水平细胞发育基本完成；②双极细胞的发 P7时，阳性细胞出现，胞体多层排列位于内核层 育：．PO时，未出现PKC．a阳性细胞； 中紧邻外网层的位置，轴突同节细胞建立联系，但伸入外网层中的树突丛不明显，此后 度增加，外网层中可见大量树突丛，此时呈现出典型的双极细胞形态。 2、酒精暴露对视网膜片层化及水平细胞和双极细胞发育的影响： (1)酒精暴露对视网膜片层化的影响： 在本研究中，通过和对照组作对比，我们发现胎儿期酒精暴露的小鼠在出生后视网 膜出现片层化延迟和增厚现象，且具有剂量依赖性和长时程效应。 (2)酒精暴露对水平细胞和双极细胞发育的影响： 在各年龄点中，酒精组的小鼠视网膜水平细胞和双极细胞的数量均减少，具有剂量 依赖性和长时程效应；此外，酒精组水平细胞出现极性紊乱，具有剂量依赖性。 3、酒精暴露对视网膜的致畸作用和胞凋亡的影响： 通过对P0各剂量组内视网膜做HE染色观察发现，对照组及低剂量组中未出现畸 形视网膜，而高剂量组中畸形率为16％，畸形主要表现为视网膜细胞增殖，致使视网膜 TUNEL来标记凋亡细胞。经统计学处理后结果显示：在生理情况下，视网膜中节细胞 及内颗粒层的细胞是通过死亡受体途径以及线粒体体途径发生凋亡，其中死亡受体是主 要凋亡途径；孕期酒精暴露时，酒精在生理凋亡的基础上，通过死亡受体途径和线粒体 体途径来诱导小鼠视网膜细胞发生凋亡，且具有剂量依赖性和长时程效应。 综上所述，孕期酒精暴露时可导致子鼠视网膜发育障碍、视网膜功能神经元数量减 少和形态异常、视网膜畸形率增加以及视网膜细胞凋亡量增加，而这些可能是导致FAS 相关眼病的病理学基础。 关键词：胎儿酒精综合症，视网膜细胞，发育，凋亡 ¨ ABSTRACT womendrink causeabortionandstillbirth When excessivealcohol pregnant duringpregnancy,itmay asalcoholCantravel the barrierswith wellas insomeirreversible throughplacentalalongblood，as resulting