《八眉猪肌内前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化》.pdfVIP

110 广东农业科学 2014年第 13期 八眉猪肌内前体脂肪细胞的 分离培养及诱导分化 陈 妍 ，张国华，陆会宁，卢建雄 (西北民族大学生命科学与工程学 院，甘肃 兰州 730030) 摘 要：以Ⅱ型胶原酶消化 5日龄八眉猪仔猪背最长肌组织 ，分离肌 内前体脂肪细胞 ，经差速贴壁法纯化后接 种培养 ，以RT—PCR和油红 O染色法对分化前后的细胞进行鉴定 ，通过观察细胞形态变化 ，细胞贴壁率测定 ，及用 MTI法检测增殖活性 ，油红 O染色提取法检测成脂诱导分化过程中细胞脂肪含量的变化 ，分析前体脂肪细胞生长特 性和分化能力 。结果表明，分离 的八眉猪肌 内前体脂肪细胞呈梭状 、形似成纤维细胞 ，贴壁性能好 ，贴壁率最高可达 90％；细胞生长良好 ，增殖曲线呈 “S”型，符合正常的细胞生长规律 ；肌 内前体脂肪细胞体外 自发分化能力弱 ，但经成 脂诱导，可以分化为具有脂肪细胞典型特征的成熟脂肪细胞 ，分化水平以时间依赖方式显著提高。 关键词 ：八眉猪 ；肌内前体脂肪细胞 ；原代培养 ；增殖 ；分化 中图分类号：$828．1 文献标识码 ：A 文章编号：1004—874X(2014)13一O110—04 Cultureandinduceddifferentiati0nofintramuscular ● · n 1h ● ● ● ■ · oreaOlpocytesIrom ItSam elpl2Sln vitro CHENYan，ZHANGGuo—hua，LUHui-ning，LUJian—xiong (CollegeofLifeScienceandEngineering,NorthwestUniversityforNationalities，Lanzhou730030，China) Abstract：Intramuscular (IM)preadipocyteswereisolatedfrom longissimusdorsimuscleobtainedfrom5-dayold pigletofBameipigsbydtigestion ofcollagenasetypeII，andpurifiedwith differentialadhesionmethod．Thecellsbefore and afterdifferentiation were identified by RT—PCR and oilred O staining，responsively．The adherence rate and proliferationofthepreadipocytesweredetected，andvariationinfatcontentinthecellsinduceddifferentiationprocesswas determinedbyoilredO stainingextraction，tostudythegrowthcharacteristicsanddifferentiationoftheIM preadipocytes． TheresultsshowedthattheIM preadipocytesisolatedrfom Bameipigsappearedtospindle——shapeandfibroblast——likeand wellattachedwith 90％ ofmaximum adherentrate．The cellsgrew well，andhadS-typeofgrowth curvewhichwasin accordwithnormalgrowthpatternofcells．Thoughh