基因组的复制及修复.pptVIP

Ch3. DNA Replication, Repair 生物学最完美实验 用普通培养基（14N）培养15N标记的大肠杆菌；用CsCl密度梯度离心法分析DNA 4. DNA的半不连续复制Discontinuous synthesis  由于DNA的两条链为反向平行，以复制叉移动的方向为基准，一条链为3’ → 5’，其新合成的DNA链沿5’ →3’ 连续进行——前导链 另一条链为5’ →3’ ，新生的DNA链先合成短的冈崎片段，不连续合成——滞后链，再由DNA连接酶连接成完整的DNA链。 这种前导链的连续复制和滞后链的不连续复制称为半不连续复制。 DNA复制反应的共同特点 1. 有特定的复制起点； 复制子（复制单元） 2. 需要引物；（3’-OH） 3. DNA合成的单向延伸 5’→3’ ；  4.半保留复制； semi-conservative  以母链为模板，合成新的互补链 5. 半不连续复制； Discontinuous synthesis  6. 复制受控制 7. 复制真实性；     原核生物DNA的复制大肠杆菌DNA的复制过程 起始——延伸——终止 DNA复制的真实性 DNA复制错配率10-9~10-10，大肠杆菌染色体中有4.5X106bp，每1000个细胞经过一次分裂才会插入一个不正确的碱基。  维持DNA复制准确性的因素： 内因： ① 按碱基配对原则，10-4~10-5 ② DNA聚合酶的作用 10-4~10-5 ? 对碱基的识别作用； 选择正确的碱基参入到引物末端 ? 对底物的识别作用； 先识别引物最后一个碱基是否正确，后识 别参入的dNTP是否正确 ? 校正阅读 3’ → 5’外切酶的作用 ③ RNA引物最终被切除，提高了复制的准确性 外因： ? 四种dNTP要平衡； ? Mn+2和Mg+2的比例、浓度（酶活） 起始阶段  链的延伸 DNA聚合酶Ⅲ DNA聚合酶Ⅲ 合成前导链和滞后链 前导链引发1次，滞后链引发几次； 复制体replisome：  在DNA复制过程中，在复制叉附近，形成以两套DNA聚合酶Ⅲ全酶分子、引发体和螺旋酶构成的类似核糖体大小的复合体称为DNA复制体。参与DNA复制的蛋白质复合物 Replication forks have functions beyond replication sister chromatid cohesion chromatin regulation 回环模型：小号模型 在DNA复制叉处由两套DNA聚合酶在同 一时间分别复制前导链和滞后链，如果滞后 链模板环绕 DNA聚合酶Ⅲ全酶，并通过DNA 聚合酶Ⅲ ，再回折与未解链的双链DNA在同 一方向，则滞后链的合成与前导链的合成在 同一方向上进行。 终止 terminus, ter 环状DNA：合成完即终止； 线状DNA：末端合成问题。 DNA replication in E.coli 复制整个细菌染色体所需固定的~40 分钟时间。 完成一个复制周期和与之相连的细胞分裂之间固有的~20 分钟时间。这段时间可能反应了组装分裂元件所需的时间. 因为细菌分裂的频率（35分钟）要高于每60 分钟一次，复制的循环必须在前一个分裂循环结束前开始。 复制方式Replication modes 双链环状单链环状线状 ??Replication eyes replication 复制眼（θ型复制） ??Rolling circle replication 滚环复制 ?? D-loop replication D环复制  θ 型复制：In 1963, J.Cairns on E.coli with 3H-T.－for circular dsDNA 滚环复制特点: （1）共价延伸； （2）模板链和新合成的链分开; （3）不需RNA引物，在正链3‘－OH上延长 （4）只有一个复制叉 （5）形成多联体（concatemer） 滚环复制的电镜照片 D-环复制：D-loop replication 线粒体、叶绿体环状DNA、少数病