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滚环复制技术的建立及在RNA病毒基因检测中的初步应用.pdf
第 卷 第 期 病 毒 学 报
2l 4 Vol . 2l No. 4
年 月 2 0 0 5
2 0 0 5 7 C~INESE JOURNAL OF VIROLOGY July
滚环复制技术的建立及在!#病毒基因检测中的初步应用
, ,
l l 2 l 2
李启明 ,马学军 ,侯云德
( 病毒基因工程国家重点实验室,北京 ; 北京金迪克生物技术研究所,北京 )
l . l00052 2 . l00l76
摘要:滚环复制是噬菌体繁殖所采取的一种基因复制方式,这种方式可使单链的环形分子在聚合酶和引物的作用
下进行体外自我扩增。本文中用可特异性连接环化的寡核苷酸链作为探针,分别进行了l 份细胞培养的禽流感病
毒 亚型样品、份细胞培养的 病毒样品和 份丙型肝炎病毒阳性血清样品的检测。检测原理是探针
~5Nl l SARS 4
与靶序列杂交后便可在t4 DNA 连接酶的作用下形成滚环复制中的环化单链分子,该分子在同温下可被特异性引
物滚动复制和支链扩增。本文还利用按禽流感病毒NAl 基因区序列合成的模拟DNA 分子对该检测方法的灵敏
度进行了测试。结果显示:利用固相RCA 技术成功检测到三种RNA 病毒的基因,该方法的灵敏度可达到能检测
l03 拷贝模式DNA 分子的水平。与传统的PCR 方法敏感性的比较尚待进一步研究。
关键词:滚环复制;支链扩增; 病毒;环形探针
RNA
中图分类号: , 文献标识码: 文章编号: ( )
R373 @78 A l000 - 872l 2005 04 - 0243 - 05
近年来有些作者采用滚环复制原理即滚环放大 个可与靶序列互补的核苷酸。当这些序列与靶序列
[,]
l 2 来扩增基因,以期
( , ) 结合后,再通过连接酶将之连接为环状,像一把挂锁
rollin circle am lification RCA
g p
实用化。因为这种复制方式可在同温下对环状单链 “锁”在检测基因的靶位上。所以有些研究者也将可环
[]
DNA 序列进行相对无限单链扩增的特点,所以分别 化探针形象地称为挂锁探针或环形探针6
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