滚环复制技术的建立及在RNA病毒基因检测中的初步应用.pdfVIP

第 卷 第 期 病 毒 学 报 2l 4 Vol . 2l No. 4 年 月 2 0 0 5 2 0 0 5 7 C~INESE JOURNAL OF VIROLOGY July 滚环复制技术的建立及在!#病毒基因检测中的初步应用 ， ， l l 2 l 2 李启明 ，马学军 ，侯云德 （ 病毒基因工程国家重点实验室，北京 ； 北京金迪克生物技术研究所，北京 ） l . l00052 2 . l00l76 摘要：滚环复制是噬菌体繁殖所采取的一种基因复制方式，这种方式可使单链的环形分子在聚合酶和引物的作用 下进行体外自我扩增。本文中用可特异性连接环化的寡核苷酸链作为探针，分别进行了l 份细胞培养的禽流感病 毒 亚型样品、份细胞培养的 病毒样品和 份丙型肝炎病毒阳性血清样品的检测。检测原理是探针 ~5Nl l SARS 4 与靶序列杂交后便可在t4 DNA 连接酶的作用下形成滚环复制中的环化单链分子，该分子在同温下可被特异性引 物滚动复制和支链扩增。本文还利用按禽流感病毒NAl 基因区序列合成的模拟DNA 分子对该检测方法的灵敏 度进行了测试。结果显示：利用固相RCA 技术成功检测到三种RNA 病毒的基因，该方法的灵敏度可达到能检测 l03 拷贝模式DNA 分子的水平。与传统的PCR 方法敏感性的比较尚待进一步研究。 关键词：滚环复制；支链扩增； 病毒；环形探针 RNA 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） R373 @78 A l000 - 872l 2005 04 - 0243 - 05 近年来有些作者采用滚环复制原理即滚环放大 个可与靶序列互补的核苷酸。当这些序列与靶序列 ［，］ l 2 来扩增基因，以期 （ ， ） 结合后，再通过连接酶将之连接为环状，像一把挂锁 rollin circle am lification RCA g p 实用化。因为这种复制方式可在同温下对环状单链 “锁”在检测基因的靶位上。所以有些研究者也将可环 ［］ DNA 序列进行相对无限单链扩增的特点，所以分别 化探针形象地称为挂锁探针或环形探针6