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miRNA研究现状及技术路线 miRNA研究现状及技术路线 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD. TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD. 内容概要 内容概要  miRNA简介  miRNA研究的应用领域  miRNA研究的技术路线 miRNA研究背景  1993年，在线虫中克隆了lin-4基因，并通过定点突变发现lin-4并不 编码蛋白，而是产生一种小RNA分子。  2001年德国，英国，美国三个实验室运用生物信息学和分子生物学手 段发现大量的miRNA.  2002年，Science杂志将“Small RNA RNAi”评为2002年度最耀眼的 明星。同时，Nature杂志亦将Small RNA评为年度重大科技成果之一。  2005年，microRNA的研究第五次入选“十大科技突破”。  。。。。。。。。 miRNA定义 miRNA定义 (MicroRNAs，miRNAs)是一种广泛存在于真核 生物中的单链小分子RNA，不具有编码功能，定位于 RNA前体的3’端或者5’端。 miRNA的生物学特征 miRNA的生物学特征  19-25nt的单链小分子，存在于真核生物中，非编码序列，没有ORF， 在3’端有1～2个碱基的长度变化  能够互补配对结合于基因序列的侧翼区域，阻遏或抑制靶mRNA的翻译  由核酸酶Dicer作用于前体的双链而生成的产物含有3’羟基和5’磷酸 的核苷酸片段，这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片 段区别开来  大多数miRNA基因以基因簇形式存在于基因组中，它们多以顺反子的 形式转录出前体转录本，且大部分位于独立的转录单位中  miRNA在物种间具有高度的保守性、时序性和组织特异性。 miRNA的产生与功能 miRNA的产生与功能 1.在细胞核内转录成前体转录本 2.被RNaseⅢ核酸酶Drosha加工成约 70-90nt的发夹状pre-miRNA 3.转运到细胞质被Dicer加工成成 熟的miRNA 4.双链miRNA分子被解链，单链的miRNA 进入一个核糖蛋白复合体miRNP(RISC) 5.通过与靶基因的3 ‘UTR区互补配对，指 导miRNP复合体对靶基因mRNA 进行切割 或者翻译抑制。 miRNA的作用机制 miRNA的作用机制 miRNA的调控特点  交叉调节：动物miRNA与靶mRNA之间的不完全配对使得任何一个miRNA 都可能作用于不同的mRNA，一个mRNA也可能受到多个不同miRNA的调节。  自我调节：自我调节参与了miRNA 的生物合成和功能。例如, 参与 miRNA生物合成的一些酶也受到其产物miRNA的调节。Dcl1 mRNA编码 一种植物Dicer蛋白参与miRNA的生成, 同时它也是miR2162的靶分子。  可逆性调节：miRNA所致的翻译抑制在某些条件下是可逆的。当mRNA作 为miRNA抑制的靶分子后, mRNA 会被送至胞浆内的P 体( Pbodies) 重 新定位。 miRNA调节方式的优点  与蛋白水平的调节相比，更加节省能量  与转录水平调节相比，miRNA调节更迅速，而且是可逆的  内含子所编码的miRNA是一种对基因组资源的高效利用 microRNA基因组分布