水牛染色体的限制酶显带.pdfVIP

遗传 HERDITAS(Beijing)12一(3)17-191990 水牛染色体的限制酶显带 孙光云）‘陈文元王子淑 王喜忠 （四川大学生物系，成都） 余桂馨 徐小波 西（南民族学院牧医系，成都） 本文用限制酶 Haetii,Alul和胰酶显带技术处理了水牛染色体，并且用CMA,ZDA/DAP［三重染 色，在荧光显微镜下观察了水牛染色体的荧光染色情况。结果表明：HaeIlI处理水牛染色体 18小时产 生G样带带纹，处理20小时产生C样带带纹。Alul处理水牛染色体20小时也能产生G样带带纹。 CMA,使染色体的着丝粒区发出明亮荧光，DA/DAPI则不能，说明着丝粒区的结构异染色质相对富含 GC碱基 。 关键词：限制酶显带，CMA,/DA/DAPI，水牛 限制比内切酶 (resttictionendonuclease, 采血。 简称限制酶）是一类能识别并切开特定 DNA 二（）淋巴细胞培养 将肝素坑凝的颈 序列的核酸内切酶。近几年来，一些作者用限 静脉血 lml接种于培养基中。培养基组成： 制晦对赤虎、小鼠、人、猩猩、果蝇、绦虫、蚊 RPMI16404m1、小牛血清lml、伴刀豆球蛋 子的染色体进行了研究，获得了不同特征的带 白A(ConcanvalinA)0.04m1(10mg/ml)、肝 型。一1]‘。同时，另一些作者对限制酶的显带机 素0.03ml(1000iu/ml)、青、链霉素0.03.n1青（ 理进行了探讨，认为其显带作用与染色体上 链霉素各10000u/m1),pH调至6.8-7.0。于 DNA片段的选择性抽提有关13［,5,11]。限制酶显 380C培养60小时，收获细胞前，小时加人0.03 带的研究还不多，但可设想，对这方面进行深人 ml秋水仙素 2（,ug/ml)。按常规程序收获细 研究，可望为进一步研究染色体精细结构、显带 胞。 用甲醇：冰醋酸 (3:1)固定，制成细胞悬 机理、基因定位等一系列的问题提供新的研究 液，滴片，文火烘干。玻片标本放置3-7天后， 手段。 分别用限制酶、胰酶Ill和氢氧化钡1]‘处理，以及 本文研究了限制酶HaeIII,Alul对水牛中 用CMA,/DA/DAPI三重染色，荧光显微镜观 期染色体显带，同时还用胰酶-Giemsa显带和 察。 CMA,/DA/DAPI三重染色技术处理了水牛染 三（）限制酶及反应缓冲液 试验所用 色体。并且结合文献对几种处理的结果进行了 限制酶 Ha。川、Alul购自华美生物工程公司。 分析讨论。 HaeIlI:100m1蒸馏水 十50cnmol/LNaCI ＋6mmo1/L Tris-HCI(pH7.4）十6.nmol/L 材 料 与 方 法 一（）材料来源 由四川省凉山彝族自 Sun伪 angyunetal：Restriction Endonuclease 治州德昌县种牛站提供的德昌水牛 B（ubalus Banding ofBuffaloMetaphase Chromosome 1)现在成都华西医科大学法医系工作。 bubalrs,Swamptype）雌雄各洲头。颈静脉 本文于 1989年8月 z1日收到。 MgC11+6mmol/L2-琉基乙醇+100EAg/ml牛 光。采用 ISO/27。胶片进行拍照。 血清蛋白。 AluI：缓冲液与HaeIII的缓冲液配制相 结 果 似，不同的是 Tris-HCIpH为7.60 （一）染色体组型及胰酶 G带核型 德 （四）限制酶处理