非小细胞肺癌患者外周血Th17和Treg表达的意义.pdfVIP

364 复旦学报 (医学版) 2015年 5月 ，42(3) 养液洗涤 3～5次 。用含有 10 胎牛血清 的 RPMI 例 ，鳞癌 3O例。 1640液调整细胞浓度为 2×10 ／mL，用于流式细胞 NSCLC患者外周血 Thl7的表达 通过流式细 学检测 。 胞术 (fluorescenceactivatedcellsorter，FACS)对 Thl7细胞流式检测 每孔加入 100 L浓度为 60例 NSCLC患者和31例健康对照的外周血 Thl7 1x10 ／mL的新鲜 PBMCs，然后分别加入1t,g／mL (CD3+CD8一IL一17+)进 行检测并统计分析，发现 离子霉素和 25ng／mL佛波酯各 20 L，再加入 10 NSCLC患 者 Th17表 达较 健康 对 照 明显增 高 t*g／mL布雷菲得菌素 A 20 L，于 37℃、5 CO： r(3．4O％±0．49 )VS．(2．16 ±0．39A0)，P 中孵 育 6h。用 PE标记 的 鼠抗人 CD8单抗 和 0．001]。在 NSCLC患者各亚组中(图 1)，腺癌组与 FITC标记的鼠抗人 CD3单抗进行细胞表面分子的 鳞癌组的Th17表达差异无统计学意义[(3．47 ± 染色 ，通过 ReagentA 固定 、ReagentB破膜后再用 0．47 )US．(3．23 ±0．51 )，P=0．24]，进展期 APC标记的鼠抗人 IL一17A 单抗或 同型 IgG1标记 (IV期)组与局限期 (I～Ill期)组 的Th17表达差异 胞内抗体取 0．4mL19／6多聚甲醛 PBS重悬细胞上 无统计学意义 [(3．35 ±0．53 )US．(3．49 ± 流式细胞仪进行检测 ，应用同型对照去除背景荧光 ， 0．40 )，P=0．3O]。 采用 FlowjO6．0分析软件对结果进行分析。Thl7 NSCLC患者外周血 Treg的表达 分析 60例 细胞 以CD3 CD8一IL一17A 细胞在 CD3 CD8一细 NSCLC患者和 31例健康对照外周血 Treg(CD4+ 胞中的百分 比表示 。 CD25+Foxp3+)FACS结果后 ，发现 NSCLC患者 Treg细胞流式检测 每孔加入 100 L浓度为 Treg表达较健康对照明显增高 [(7．76 ±1．58 ) 1xl0／mL的新鲜 PBMC，分别加入 PE标记 的鼠 72S．(4．40 ±1．08A0)，P0．001]。在 NSCLC患者 抗人 CD25单抗和 FITC标记的鼠抗人 CD4单抗进 各亚组中(图 2)，腺癌组与鳞癌组 Treg表达差异无 行细胞表面染色，用 Treg染色试剂进行破膜 、固 统计 学 意义 [(7．98 ±1．89 )US．(7．5596／± 定 ，PBS洗涤、离 心后 ，加入 APC标记 的 鼠抗人 1．200／4)，P=0．3o2，而进展期组 Treg表达较局限期 Foxp3单抗及同型IgGl标记胞 内抗体 ，0．4mL1 组 明显升高E(8．16 ±1．56％)US．(6．97 ±I． 多聚 甲醛 PBS重悬细胞上流式细胞仪进行检测 ，应 35 )，P=0．OO5]。 用同型对照去除背景荧光 ，采用 Flowjo6．0分析软 NSCLC患者外周血 neg与 Th17比值的变化 件对 结果进 行分析。Treg细胞 以 CD4 CD25 分析 NSCLC患者和健康对照外周血 Treg与 Th17 Foxp3 细胞在 CD4 细胞 中的百分比表示 。 比值 (Treg／Th17)变化发现，NSCLC患者 Treg／Th17 统计学方法 所有数据采用 SPSS17．0软件 较正常对照明显增高 [(2．36±0．73)1)S．(2．05± 包进行统计学分析 ，计量资料结果用 ±S表示 。数