改良的乳鼠心肌细胞分离与培养新方法.pdfVIP

广东药学院学报 JournalofGuangdongPharmaceuticalUniversity Jun．2015，31(3) 改良的乳鼠心肌细胞分离与培养新方法 黄礼杰，陈耀旭，杨莹莹，殷春霞，陈睿，韩福平，唐羽欣，谭文 (华南理工大学 生物科学与工程学院／生物医药前孵化器／广东省发酵与酶工程重点实验室， 广东 广州 510006) 摘要：目的 探讨一种简单有效的SD大鼠乳鼠心肌细胞分离与培养方法。方法 取出生24h以内的大鼠 心室，0．08％的胰蛋白酶反复消化多次，离心收集心肌细胞，差速培养后 5．溴脱氧尿嘧啶核苷纯化心肌 细胞。用全细胞膜片钳方法，记录心肌细胞动作电位，并用激光共聚焦显微镜观察钙瞬变、线粒体膜 电位。结果 心肌细胞存活率大于93％，心肌细胞纯度大于96％，细胞形态 良好，出现节律性搏动，钙瞬 变波形稳定 、规律，动作电位和线粒体膜电位均正常。结论 本研究方法分离心肌细胞存活率高、活性 好，是一种简单、高效的心肌细胞原代培养方法，可广泛应用于各种研究。 关键词：新生大鼠；心肌细胞；原代培养 ；钙瞬变；线粒体膜电位；动作电位 中图分类号：R一331 文献标志码：A doi：10．3969／j．issn．1006．8783．2015．03．023 文章编号：1006—8783(2015)03—0388—05 An improvedmethodforisolationandcultureofneonatalratcardiomyocytes HUANGLijie，CHENYaoxu，YANGYingying，YINChunxia，CHENRui，HANFuping，TANGYuxin，TANWen (SchoolofBioscienceandBioengineering，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510006，China； Pre—incubatorforInnovativeDrugsandMedicineCenter，SouthChinaUniversityof Technology，Guangzhou 510006，China；GuangdongProvincialKeyLaboratoryofFermentationandEnzymeEngineering，Guangzhou 510006，China) Abstract：0bjectiveToexplorea simpleandeffectiveprimary culturemethodofneonatalrat cardiomyocytes．MethodsThe ventricularmyocardium wasremoved from neonatalratwithin 24 h after birth．The cardiomyocyteswere separated byrepeated digestionwith 0．08％ trypsin and collectedby centrifugation．Differentialadhesionmethodand5-bromodeoxyuridine (BrdU)wereusedinpurifying cardiomyocytes．Theactionpotentialwasmeasuredbywholecellpatch—clamp．Thecalcium transientsand mitochondrialmembranepotentialofcardiomyocyteswereobservedbyconfocalmicroscope．ResultsThecell viabilitywasmore than 93％．Thepurity ofcardiomyocyteswasmore than 96％．The morphology of cardiomyocytesappeared norma1．The calcium transientswere steady and regular．The mitochondrial membranepotentialandactionpotentialofcardiomyocyteswerenorma1．ConclusionTheprimary culture methodofneonatalratcardiomyocytesissimpleandeffective，whichcouldbeappliedt