甘草过表达HMGR、SQS1、β-AS基因再生植株的诱导.pdfVIP

物 技 术 通 讯 r… N ． LETTERSINBIOTECHNOLOGY VO1．2513lO3j·MMaay,2u0l15 393 doi：10．3969~．issn．1009—0002．2015．03．021 研究报告 甘草过表达HMGR、SQS1、E／； S基因再生植株的诱导 高雅，刘颖，文浩，王礼强，袁伯川，刘春生 北京中医药大学 中药学院，北京 100102 [摘要] 目的：诱导过表达3一羟基一3一甲基戊二酰CoA还原酶 (HMGR)、鲨烯合成酶 1(SQS1)和p一香树脂醇合成酶 (-As)基因的甘草再生植株。方法：以植物双元表达载体pCAMBIA1305．1为载体骨架，HMGR、SQS1 一As基因为 目 的基因，利用基因重组试剂盒eFusionCloningKit分别构建含有3个外源基因的重组载体 ，并将其转入根癌农杆菌 EHA105，采用根癌农杆菌介导法将 目的基因转入甘草外植体。结果与结论：获得了过表达HMGR、SQS1和卢 S基因 的甘草愈伤组织及试管苗，为进一步研究这3个功能基因过表达对甘草酸合成的影响奠定了基础。 [关键词] 甘草；3-羟基一3一甲基戊二酰CoA还原酶；鲨烯合成酶 1；B一香树脂醇合成酶；过表达；转基因植株 [中图分类号] Q943．2 [文献标识码] A [文章编号] 1009—0002(2015)03—0393-06 Induction of Glycyrrhiza uralensis Regenerated Plantlets Over。_Ex· pressingHMGR，SQS1andl9}一ASGenes GAO Ya，LIUYing，WEN Hao，WANGLi—Qiang,YUANBo—Chuan，LIUChun—Sheng：。： SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofCineseMedicine，Beijing100102，China Corresponding author．E—mail：max 1iucs@263．net [Abstract]0bjective：ToinduceGlycyrrhizauralensisregeneratedplantsover—expressing3-hydroxy一3一methylgluta— ryl-CoA reductase(HMGR)，squalenesynthetase 1(SQS1)andB—amyrinsynthase(卢一AS)genes．Methods：The pCAMBIA1305．1wasusedtoconstructvectorscarryingexogenousgenesHMGR，SQS1and卢一AS，usingeFusion CloningKit．RecombinantvectorsweretransferredintodisarmedAgrobacterium tumefaciensEHA105，andtheninto G．uralensis explants．respectively．Results Conclusion：The callus and test—tube plantlet over—expressing HMGR，SQS1and 一ASgeneswereobtained．Thisworkprovidesabasisforfurtherstudiesconcernedwithexplor— ingthe effectsofoverexpression ofthethreefunctionalgeneson glycyrrhizic acid biosynthesis． [Keywords] G，c)，rr ouralensis；3-hydroxy一3一methylglutaryl—CoA reductase；squalenesynthetase 1；3-amyrin synthase；overexpression；transgenic plants 甘草(Glycyrrhizaura