质谱技术在蛋白质,多肽化学中的应用.pdfVIP

维普资讯 有机化学 YOUJI HUAXUE，1996，埘 ，209--217 综述与进展 ＼《 ／／J j 一 ‘ 、 一 质谱技术在蛋 白质、多肽化学中的应用 。 0 ’ 2／7 (中国科学院毛上海二有垄机化学垒研兰究所些：． ． 上海 ．200032) 摘要 ：文中介绍了几种新的质谱技术：快原子轰击质谱 (fastatombombardment—MS，简称 FAB MS)、串联 质谱 (tandemmass5pectr叽 etry．简韩 Ms／MS)、电喷雾 电离质谱 (electrosprayionization—MS简称 ESI—MS)和基 质辅助 的激光解吸 电离 飞行时间质谱 (matrixesaLstedlaserdesorptionionizationtimeofflightMS简称 MALDI— TOF—MS)，这几种技术的相互补充使得质谱比较有效地用于蛋白质结构测定。文中倒举了几个实倒说明了它们 在蛋白质的分子量测定，蛋 白质和多肽的纯度鉴定，糖肽的结构测定及特殊的 N一端封}玎的或一般 的蛋 白质和 多肽的顺序测定中的应用。 ． I 关■调：质谱分析，蛋白魔结构．质谱新技术 ．。- 一 — — — — 一 々 u1— 一 1 前言 本世纪六十年代，科学家们曾注意到质谱技术在蛋 白质和肽的结构分析中存在的潜力，但 由 于离子化技术的限制，近三十年来，质谱技术只在有机化台物小分子的结构测定中得到应用，而 对于大分子 (分子 量超过 1，000Da)．极性分子和难气化 的分子，则显得无能为力 70年代， Macfarlane_1等人发明了一种叫等离子体解吸(plasmadesorption，简称PD)的离子化技术．使得质 谱测定分子量范围扩大到几千道尔顿。80年代初，Barber 等人叉引入 了快原子轰击 (fastatom bombardment，简称FAB)电离技术，并成功地测定了一个 26肽的结构．从而使得质谱技术应用于 蛋白质和肽的结构测定这一设想变为现实。8o年代末，另两种更新的技术得到发展，它们分别是 电喷雾 电离 (electrosprayIonization，简称 ESI ·)和基质辅助的激光解吸电离 (matrixa~[sted laserdesorptionionization，简称 MALDI) l，这两种技术解决了极性大、热不稳定的蛋白质、多肽 分子的离子化和大分子量的测定问题 。电喷雾 电离的分子可 以带多电荷，因为质谱是以质荷 比 ( ／。)作为横座标的，如一个分子带一个 电荷测得的分子量为 1M；如带 10个 电荷 20个 电荷则测 定的分子是可 以IOM，20M。使分子量测定范围远远扩大。另外，这两种质谱无论在灵敏度、准 确性和在分析混合物的复杂性方面都 比以前的技术有了显著的改善，从而大大拓宽了质谱技术在 蛋 白质领域中的应用，可 以说是质谱技术在生物大分子中应用的一场革命。 2 几种质谱技术简介 PD质谱仪是继高压液相色谱仪、氮基酸组成分析仪和顺序仪之后进入蛋 白质化学实验室的分 析仪器，但 由于这种仪器在设备上要求非常苛刻，且测定分子量准确性较差，因而并没有得到广 泛应用。直到 80年代．FAB质谱 问世，才真正推广到蛋 白质领域。FAB质谱也叫液体二次离子 质谱 (1iquidsecondaryionmassspectrometry，简称 LSIMS)。它是一种用快速原子轰击被分散在高 沸点溶剂 (如甘油)中的待测化台物，从而产生分子离子。快原子的产生是通过 电离隋性气体Ar、 1994—12—19收稿．1995 05—08修回。