黑大蒜提取物对固有免疫细胞抗肿瘤活性影响.pdf

·中文论著摘要· 黑大蒜提取物对固有免疫细胞抗肿瘤活性的影响 刖吾 大量研究证明大蒜成分具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节和抗菌等活性。其抗 肿瘤机制大致包括阻滞细胞周期、诱导凋亡、抑制血管生成和肿瘤转移等。 黑大蒜是一种新型大蒜加工产品，由新鲜大蒜经过一定的温度和湿度处理而 显升高，且无刺激性气味，可直接食用。有研究显示黑大蒜乙醇提取物的体外免 疫刺激活性(主要包括促进人淋巴细胞增殖和巨噬细胞分泌NO、TNF．q以及抗肿 瘤作用和自由基清除能力)均强于新鲜大蒜乙醇提取物。有关黑大蒜对固有免疫 细胞抗肿瘤活性影响的报道极少且其抗肿瘤机制尚未明确，本实验室在证明黑大 蒜提取物能够显著增强正常小鼠NK细胞杀伤活性，提高NO水平，以及增强Thl 型细胞免疫应答的基础上，应用自制的黑大蒜提取物溶液，以小鼠成纤维肉瘤细 胞McthA异位移植小鼠以及纤维肉瘤细胞系为研究对象，研究黑大蒜提取物对固 有免疫细胞抗肿瘤活性的影响及其抗肿瘤机制，为黑大蒜的抗肿瘤应用进一步提 供实验依据。 实验材料 l、主要试剂 黑大蒜提取物粉末，红细胞裂解液，胰蛋白酶，RPMI1640培养液，标准胎 牛血清，O．01MPBS缓冲液，生理盐水，小鼠中性粒细胞分离液，碘化丙啶，LDH 96@ Cell V-FITC Non-RadioactiveProliferation AQueous Assay，AnnexinApoptosis DetectionKit等。 2、实验细胞系及动物 1 雌性BALB／c小鼠，6--,8周龄，SPF级，购自中科院上海实验动物中心。 小鼠成纤维肉瘤细胞MethA，小鼠纤维肉瘤细胞L929，小鼠成纤维细胞3T3， 小鼠T淋巴瘤细胞Yac。l。 实验方法 1、实验分组及处理 (1)观察黑大蒜提取物对正常小鼠中性粒细胞抗肿瘤活性的影响 雌性BALB／c小鼠随机分为4个实验组和1个对照组，每组5只。给予实验 生理盐水。连续注射5天。实验组小鼠分别于未次注射后的第1、3、5、7天提取 腹腔中性粒细胞，对照组小鼠在末次注射后第7天处死。 (2)观察黑大蒜提取物对荷瘤小鼠生存率的影响 雌性BALB／c小鼠随机分为黑大蒜组和荷瘤对照组，每组6只。每只小鼠右 A细胞，成瘤率100％。在接种肿瘤的第7天，给 侧背部皮下接种4x106个Meth 予黑大蒜组小鼠每天腹腔注射2001．tl浓度为10mg／ml的黑大蒜提取物溶液，荷瘤 对照组每天腹腔注射2001xl的生理盐水，连续注射7天。此后常规饲养，记录小 鼠存活情况。 (3)观察黑大蒜提取物对荷瘤小鼠中性粒细胞ROS产生水平、NK细胞杀伤 活性及脾细胞培养上清NO水平的影响 雌性BALB／c小鼠随机分为黑大蒜组、荷瘤对照组和空白对照组，每组lO只。 空白对照组不予处理。其余小鼠右侧背部皮下均接种lxl06个MethA细胞，成瘤 率100％。在接种肿瘤的第7天，给予黑大蒜组小鼠每天腹腔注射2001．d浓度为 10mg／ml的黑大蒜提取物溶液，荷瘤对照组每天腹腔注射2001．d的生理盐水，连续 注射7天。于末次注射后第4天处死。每组各取5只小鼠用于提取腹腔中性粒细 胞，剩余小鼠用于制备脾细胞悬液。 (4)观察不同浓度黑大蒜提取物对细胞的增殖抑制的影响 将MethA细胞、L929细胞和3T3细胞分别与不同浓度黑大蒜提取物溶液(O 2 对细胞的增殖抑制作用。 (5)观察黑大蒜提取物对MethA细胞周期及细胞凋亡的影响 1640培养液分别处理MethA细胞24 用4mg／ml黑大蒜提取物