DDAH2过表达改善糖尿病大鼠血管内皮功能不全及高糖对DDAH%2fADMA%2fNOS%2fNO通路损害.pdf

DDAH2过表达改善糖尿病大鼠血管内皮功能不全及高糖对 DDAH，ADM刖NOS／NO通路损害 摘要 研究背景和目的糖尿病是严重危害人类健康的常见病，糖尿病易并发 动脉粥样硬化等血管并发症，现已成为糖尿病病人死亡主要原因。一氧化氮 (NO)介导的内皮依赖性血管舒张反应降低不仅是糖尿病血管并发症的早 期标志，而且在糖尿病血管并发症的发生发展中起重要作用。大量研究证明， 导致血管内皮功能不全的重要物质。内源性ADMA主要通过二甲基精氨酸 种亚型均存在于血管内皮细胞，但前者主要分布于表达神经型NOS的组织， 后者则主要分布于表达内皮型NOs的心血管组织。有研究表明，当血管壁 本课题拟在链佐星诱导的糖尿病大鼠模型和高糖孵育培养的ECV304细胞： 转糖尿病血管内皮依赖性舒张功能不全和高糖对细胞NO合成的损害；并比 糖尿病血管并发症形成过程中的重要作用。为其临床防治及药物开发拓开新 的思路，为糖尿病血管内皮功能不全的基因治疗提供可靠的实验依据。 60mg／kg)制备糖尿病大鼠模型，治疗组大鼠在糖尿病模型成立后从饮水中 治疗组和PDlrC对照组大鼠血糖、血脂水平及胸主动脉形态改变，同时检测 内皮依赖性舒张反应。②用重组hDDAI--12腺病毒(1．5×1010virus／m1)体外 转染正常大鼠和糖尿病大鼠的胸主动脉环，并检测血管组织DDAH2表达、 糖尿病大鼠的血管内皮功能不全。③分别用30mmol／L葡萄糖孵育正常 的ECV304细胞(pcDNA3．1)72 转高糖对细胞中DDAH，Am压A，NOS／NO通路的损害。 结果①糖尿病大鼠血糖和血脂明显升高，而血管组织DDAH活性明 w0．098±0．010 显降低(0．052±0．003 U／g its 中ADMA浓度显著升高(2．18±0．23 itsCon) 1．14±0．129mol／L。P0．01 its 和胸主动脉内皮依赖性舒张反应降低(52±2．3％its94±1．8％，P0．01 its Con)，半数有效浓度(ECs0)升高(239．64±20．0088．38±8．79nmol／L。 仅降低血糖，而且保护血管DDAH活性，阻止内源性ADMA升高，改善糖 尿病大鼠血管内皮功能不全。②用重组hDDAH2腺病毒体外转染糖尿病大 鼠的离体胸主动脉环后，经RT-PCR可检测到人的DDAH2mRNA在血管组 w its 组(o．220±0．0200．057±0．006 PO．01)，并改 O．055±O．008U／gpro，all 善转染血管环的内皮依赖性舒张反应，表现为血管环对乙酰胆碱诱导的最大 舒张反应较未转染的糖尿病大鼠血管环显著升高(85±1．7％w54±1．2％。 P0．01，P0．01itsuntransfecteddiabetic its 248．74±10．67 w untransfecteddiabetic nmol／L，P0．01 aortas)。而用相同滴 其内皮依赖性舒张功能障碍。用同样滴度的重组hDDAH2腺病毒感染正常 对照组大鼠的胸主动脉环，虽然血管环对乙酰胆碱的最大舒张反应没有改 变，但对低浓度的乙酰胆碱反应性更加敏感，即EC50明显降低，(76．68± 8．17vsl32．68±20．29 its nmoI／L，P0．05untransfectedcon