T9代“玉米稻”的中玉米DNA侧翼序列鉴定克隆.pdf

摘要 本实验室通过远缘分子杂交技术将玉米DNA导入水稻，获得了大量的水稻变异材 料，经过多代自交筛选，得到一批具有与供体玉米性状相似、能稳定遗传的水稻变异株 系。本研究选取稳定遗传至第九代的水稻变异株系131．5．2作为研究材料，鉴定和克隆 玉米DNA片段，旨在为远缘分子杂交育种技术介导玉米DNA创造水稻新种质提供理 论数据。 PCR方法在T9代变异株系131．5．2中对 DNA片段(P5M3．131-349)，本研究采用Nested 该序列进行验证。结果显示，在T9代变异株系131．5．2中扩增出一条212bp的目的片段。 经BALST分析，该片段与在阳性对照玉米中扩增出的目的带匹配率为100％；与 定遗传。 色体上。根据MaizeGDB数据库中公布的玉米第10号染色体碱基序列，设计一对引物 对照玉米和T9代变异株系131．5．2中均扩增到一条长为541bp的目的条带(在阴性对照 水稻中没有扩增出目的带)，经BALST分析，T9代变异株系131．5．2中扩增出的目的 条带(P5M3．349—541)与阳性对照玉米中扩增出的目的带的核苷酸同源性为100％。 P5M3．349．541和P5M3—1 白质为半胱氨酸型内肽酶／泛素硫酯酶。这进一步证明水稻变异株系基因组中整合有玉米 DNA，并且具有编码蛋白质的功能。 半胱氨酸型内肽酶／泛素硫酯酶蛋白含有495个氨基酸残基。蛋白质结构预测显示， 该蛋白质二级结构主要以无规则卷曲为主，具有2次跨膜疏水区，主要位于质膜、叶绿 体体膜、高尔基体、内质网等膜上，其在叶绿体膜上的可能性最大。水稻变异株系131—5—2 表现出的气生根、紫茎、紫叶缘，紫叶鞘等性状是否与该蛋白有关有待进一步研究。 关键词：水稻，玉米DNA，NestedPCR，侧翼序列 ABSTRACT numbersofricevariantsmaterialswereobtainedinour Large rice derivedfrom maize DNA intothe of were transferringgenomicfragmentsreceptorby timesof haveobtained distantmolecule several self-crossbreed，we hybridization．Through todonormaize． stableheritablericevariantlineswhichhavesimilarcharacteristics many Ricevariantline131-5．2whichhas inheritedtotheninth wasresearched stably generation by theoretical identificationand ofmaizeDNA fromitinorderto the cloning fragments provide rice the datafordistantmolecule thatcreatesnew germplasmby hybridizationtechnology transfe