雄激素受体辅助因子在前列腺增生组织前列腺癌中表达.pdfVIP

．中文论文摘要． 雄激素受体辅助因子在前列腺增生组织 与前列腺癌中的表达 目的 前列腺相关疾病是世界范围内最常见的男性疾病。在西方国家，前列腺增 生是最普遍的男性良性赘生物，而前列腺癌则是发病率最高的男性肿瘤。雄激 素受体属于类固醇核受体家族的一员，参与正常前列腺组织的生长，并介导前 列腺组织的增生及前列腺癌的形成，与前列腺病变密切相关。雄激素受体辅助 因子是与雄激素受体转录功能相关的蛋白质，对雄激素受体介导的转录发挥辅 助激活、辅助抑制或者连接蛋白的作用。 根据对雄激素受体转录效应的不同，雄激素受体辅助因子可分为辅助激活 等。本研究应用免疫蛋白印迹法和免疫组化检测雄激素受体辅助因子ARA54与 ARAl60在前列腺增生及前列腺癌组织中的表达，为临床上前列腺癌的治疗靶 点提供信息。 方法 l、蛋白免疫印迹：组织及细胞加4℃预冷的PBS洗涤三次，加入适量裂解液 RIPA (1ml bufferSD入10mlPMSF)，摇匀置于冰上裂解30分钟。收集细胞 lysis 碎片及裂解液4℃下12000rpm离心5分钟。照BCA试剂盒的实验方法测出前列腺 组织及细胞的蛋白浓度，以确保每个上样孔加入50微克的总蛋白量。通过煮样， 小时，充分TBST洗涤后使用ECL试剂盒化学发光。 苯、酒精脱蜡至水，3％双氧水浸泡20min，封闭内源性过氧化物酶活性。高压枸 5min，滴加10％血清，阻断非特异 橼酸盐抗原修复，降至室温水洗后PBS洗3次X i 性结合，37℃孵育10min。一抗(工作浓度l l 滴加生物素标记二抗，3712孵育10min，PBS洗3次X5rain，滴加辣根过氧化物酶 标记的链霉素卵白素工作液37C孵育10min，DAB显色，苏木素复染，脱水、干 燥中性树脂封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。免疫组化结果判定：镜下观察 肿瘤细胞和增生组织细胞，以胞质或包膜出现棕黄色、染色强度高于背景非特异 性染色者为阳性信号。高倍镜下取4个不同视野，各计数200个细胞的阳性细胞数， 取其平均值计算每一标本的阳性表达率。阳性细胞5％为阴性，596～50％为弱阳 性，5096为强阳性。 3、数据分析应用SPSS13．0统计分析软件行数据分析处理，阳性率的比 较采用Z2检验进行检验分析，P0．05为有显著性差异。 结果 l、蛋白免疫印迹：9例前列腺增生组织的ARA蛋白表达水平相近，ARA54 在前列腺增生组织中呈高表达，ARAl60呈低表达。在前列腺癌细胞中，ARA54 DUl45。 2、免疫组化结果显示ARA54蛋白在前列腺增生组织中的阳性表达率显著 高于前列腺癌。ARA54蛋白的阳性表达与前列腺癌的临床分期呈正相关：与肿 瘤分化程度无关。 结论 雄激素受体辅助因子在前列腺增生及前列腺癌中的蛋白表达量差别较大，且 免疫印迹与免疫组化结果不一致。ARAl60与雄激素非依赖性前列腺癌的病理改 变可能有一定的关系，可作为前列腺癌雄激素敏感性变化的一个潜在诊断标记 物。ARA54对前列腺癌的雄激素依赖性变化不够敏感，应进一步实验观察ARA54 在前列腺癌中的转录变化方式及作用位点，为进一步研究创造可行条件。 关键词 ARAl60 前列腺增生前列腺癌ARA54 ．英文论文摘要． of in ExpressionAndrogen Benign ReceptorCo-regulators Prostatic