《人胎盘叶酸受体蛋白的提取、纯化及鉴定.》.pdfVIP

中国生育健康杂志2014年第 25卷第 1期 www．cirh．net或 http：／／www．cirh．org · 37 · · 实 验 研 究 · 人胎盘叶酸受体蛋白的提取、纯化及鉴定 王琳琳 袁悦 任爱国 【摘要】 目的 建立人胎盘叶酸受体蛋白的提取及纯化方法，并对其进行定性定量检测。 方法 采集医 院分娩的正常人的胎盘样品。将胎盘剪碎，组织匀浆 ，酸化及中和，过柱提纯，组分鉴定，除杂并用分子筛进一步纯 化。利用 Bradford检测蛋白浓度，用SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法进行蛋白分子量检测，用WesternBlot对 提取蛋白进行定性鉴定。 结果 用于本实验的胎盘湿重370g。在经过亲和层析柱抽提后的8个留样组分中，组 分2～5含有 目的蛋白的粗提物。经过分子筛等方法除杂后，Brafdord蛋白检测显示本次共提取蛋白总量345P,g。 SDS·聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法结果证实此蛋白分子量大约为35～40KDa。WesternBlot方法显示此蛋白与 叶酸受体抗体特异结合。 结论 使用本研究方法能够从人胎盘中成功提取并纯化人源的叶酸受体蛋白，每 100g胎盘可提取叶酸受体蛋白93 g。本研究为以后的叶酸受体抗体检测奠定了基础。 【关键词】 叶酸受体；胎盘； 蛋白纯化 Extraction，purificationandidentificationoffolatereceptorfrom humanplacenta WANGLinlin，YUAN Yue，REN aiguo．InstituteofReproductive＆ 姚Health，MinistryD，HealthKeyLaboratoryofReproductiveHealth，PekingUniversi— ty．Beoing 100191，China [Abstract] Objective Toestablishthemethodofextraction，purificationandidentificationofoflatereceptorfrom humanPlacenta． M ethods A placentawascollectedfrom ahealthywomna whendeliveringinahospita1．Theplacental tissueWaShomogenizedaftercutting．TargetproteinWas extractedbyaffinitychromatographyfrom thehomogenateaftera． cidificationandneurtalization，thenWas purifiedbychemicalnadphysical methods．Th eproteinextractionwasqunatified byBrafdordproteinassay．Themolecularweightwasdeterminedthroughsodium dodecylsulfatepolyacrylamidegelelectro- phoresisandsilverstain．Identificationof theproteinwasperfomr edbyWesternBlot． Results Thewetweightofthe placentausedforproteinexrtactionWas 370g．Tragetproteinwaselutedintofraction2-5among8fractionsafterextraction byaffinitychromatographynadwasfurtherpurified．ResultsofBrafdord proteinassayshowedthatatotal of345ixgprotein wasobtained．Themolecularweihgtwasabout35-40KDa．WesternBlotshowedthattheproteincouldspecificallybindto theantibodytofolatereceptor． Conclusion Themethodofextraction，purificationnadidentificationofoflatereceptor