来氟米特对5%2f6肾大部切除大鼠肾脏保护作用实验与研究.pdf

中文摘要 来氟米特对5／6肾大部切除大鼠肾脏 保护作用的实验研究 摘 要 目的：肾脏纤维化是多种肾脏病慢性进展至终末期肾衰 竭的共同通路，巨噬细胞增殖浸润和肌成纤维细胞增殖是肾 脏纤维化过程中的中早期事件，对肾脏纤维化进展起关键作 用。如果在产生不可逆转的组织学改变之前，抓住治疗时期， 可阻断或逆转肾脏纤维化的发生和进展。目前慢性肾功能衰 竭的非替代治疗措施主要是低蛋白饮食和血管紧张素转换 床和实验研究中均发现ACEI或ARB不能抑制或逆转疾病进 展。最近研究发现在5／6肾大部切除模型中早期联用霉酚酸 酯(MMF)和ARB类药物，几乎完全阻断了肾脏纤维化的进 展。MMF是一种新型免疫抑制剂，但其初用于临床尚需观 察它的长远期效果及不良反应，且其价格较高。来氟米特是 一种非常有前景的免疫抑制剂，通过抑制嘧啶的合成抑制淋 巴细胞功能，已广泛用于类风湿性关节炎的治疗，不良反应 轻微。有文献报道来氟米特能改善慢性移植后肾功能障碍 (CAD)，对人类肾脏有保护作用，但其机制未明。有研究 发现来氟米特可抑制局部巨噬细胞的增殖和浸润；减少血管 平滑肌细胞增生，而平滑肌细胞与肌成纤维细胞有很多共同 特征，所以来氟米特对肌成纤维细胞可能也有抑制作用。来 氟米特是否通过抑制巨噬细胞增殖浸润和肌成纤维细胞增 殖起到保护肾脏作用的呢?本文通过动物实验观察5／6肾大 中文摘要 部切除大鼠模型中肾皮质巨噬细胞的特异性抗原(CD68)， 增殖细胞核抗原(PCNA)、肌成纤维细胞标志抗原(a-平滑 肌肌动蛋白a-SMA)、转化生长因子(TGF-13。)与肾组织结 构及肾功能之间的关系：并通过来氟米特的干预，观察该药 物对以上指标及肾功能的影响，探讨其保护肾脏功能的机 理，为人类肾脏纤维化的防治提供新思路和途径。 术组30只，手术组给以分离大鼠左侧肾动脉及其分支，结 扎其中的左上支和中支并剪断，使左肾梗死2／3，3天后再将 大鼠右肾摘除。假手术组则仅分离肾动脉及其分支，’不予结 扎。术中大鼠死亡1只。术后48h大鼠共死亡8只。手术后 第三天再将大鼠按随机原则分为2组。Nx组lO只，LEF组 11只，LEF组大鼠每日来氟米特5mg．kg_t．d-‘灌胃，Sham组、 Nx组每日给与等量自来水灌胃。所有大鼠均自由饮水和迸 食。在第四周将每组各5只大鼠和第八周将每组剩余大鼠称 重，置于代谢笼中，收集24小时尿液，检测24小时尿蛋白， 留取血、尿标本，分别检测血肌酐、血总蛋白、自蛋白、转 氨酶等；摘取残肾，称肾重，进一步计算肾脏肥大指数(肾 重／体重比值)，并用体重校正；部分肾组织置于10％中性甲 醛中以各制作石蜡切片，其余肾组织直接至于液氮中，冻透 后再转入一700C冰箱中保存备用。采用免疫组化方法测定肾 皮质平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)及 Blot CD68．结果通过图像分析系统进行半定量分析。Western 3．1图像分析系统分 检测TGF．13，，最后用Gel．Pro Analyzer 析免疫印迹条带IoD值。光镜行HE、PAS及Masson染色。 中文摘要 所有结果用均数4-标准差(i±s)表示，组间比较采用方差 分析，在SPSSl0．0统计分析软件上进行。 结果：在8周的实验过程中Nx组血肌酐和24小时尿蛋 白呈进行性升高，LEF治疗后明显低于Nx组(PO．os)。在实 验期问三组大鼠体重均有不同程度增长，Sham和LEF组体 重增长明显大于Nx组(PO．05)。8周期间Nx组肾小球和小 管问质区a-SMA，PCNA及TGF一13I表达均呈进行性升高， CD68的表达在4周时达高峰，第8周时略有降低；LEF治 以降低CD68的表达最为明显，与Sham组无明显差异 (P0．05)。肾组织形态学观察：Nx组第4周时出现肾小球体 积增大，间质炎细胞浸润，系膜增生，部分毛细血管袢与球 囊粘连；第8周时大多数肾小球中重度系膜增生，毛细血管 袢受压