罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆和原核表达_邢爱佳.pdfVIP

园 艺 学 报 2013 ，40 （6 ）：1195 –1204 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达 1 2,3,* 1,3 3,4 1 3,4 3,4,* 邢爱佳 ，马小军 ，莫长明 ，潘丽梅 ，韦鹏霄 ，唐春风 ，唐 其 1 2 3 （广西大学农学院，南宁 530004 ； 中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193； 广西壮族自治区药用植物园， 4 南宁 530023 ； 广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，南宁 530023 ） 摘 要：从罗汉果（Siraitia grosvenorii ）转录组中获得一条与罗汉果甜苷Ⅴ生物合成相关的葡萄糖基 转移酶（UDPG ）的unigene 片段，以罗汉果授粉后 70 d 的果实RNA 为模板，利用 RACE 和 RT-PCR 技 术克隆 UDPG 全长基因，将克隆得到的 SgUDPG1 基因连接到原核表达载体 pEASY-E1 上，构建融合表达 载体，转化到大肠杆菌 BL21 （DE3 ），通过 IPTG 诱导表达，重组蛋白纯化，SDS检测表达产物以 及 Western-blotting 和质谱鉴定蛋白产物。结果表明，获得了 1 条 SgUDPG1 ，全长为 1 959 bp，开放阅读 框 ORF 为 1 365 bp，编码 1 条 454 aa 的肽链，理论分子量为 51.2 kD，等电点为 5.39，具有植物中次生代 谢产物糖基转移酶特有的保守结构域 PSPG-box motif 。SgUDPG1 在授粉后 50 d 和 70 d 的果实中表达逐渐 升高，是对照授粉后 3 d 的 5.16 倍和 13.12 倍，与果实中甜苷Ⅴ含量呈相同趋势。此基因的 ORF 可以在 大肠杆菌中表达，并且可以纯化出比理论分子量大 5.3 kD 的融合蛋白，通过Western-blotting 和质谱鉴定， 确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶。 关键词：罗汉果；葡萄糖基转移酶；RACE ；原核表达；融合蛋白 中图分类号：S 567.23+9 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2013 ）06-1195-10 Cloning and Prokaryotic Expression of UDP-glycosyltransferase in Siraitia grosvenorii XING Ai-jia1 ，MA Xiao-jun2,3,* ，MO Chang-ming1,3 ，PAN Li-mei3,4 ，WEI Peng-xiao1 ，TANG Chun-feng3,4 ，and TANG Qi3,4,* 1 2 （Agricultural College of Guangxi University ，Nanning 530004 ，China；Institute of Medicinal Plant Development ，China 3 Academy Medicinal Science