1 科研选题2015-9.ppt

干扰素调节因子3第二内含子内剪接异构体1的转录调控 干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3, IRF-3)是调节Ⅰ型干扰素(IFN-α/β)基因表达的关键转录因子,在固有免疫反应和获得性免疫反应中的起重要性作用。目前,国内外关于IRF-3的研究几乎全部集中在IRF-3参与的抗病毒自身免疫信号通路中的作用,而关于IRF-3的自身转录调控机制尚不十分清楚。生物信息学分析结果表明IRF-3第一内含子和第二内含子内有新的转录起始位点(transcription start site, TSS),表明该基因有多个启动子和多个剪接异构体,但现有文献未见该分子多个启动子鉴定和详细的剪接异构体分析的报道。 博士论文 miR-146a基因遗传变异在前列腺癌发生发展的作用及其分子机制的探讨 前列腺癌的具体病因目前尚不完全清楚。普遍认为,前列腺癌的形成是一个多因素和多阶段的过程,是环境危险因素和遗传因素共同作用的结果。流行病学调查显示,环境危险因素暴露在前列腺癌发病中具有重要的作用,但尽管很多人接触相同的致癌危险因素,最终仅有少数人发生前列腺癌,提示个体易感性差异在前列腺癌发病过程中发挥作用。microRNAs(miRNAs)属于非编码RNA,主要通过在转录后水平调控基因表达。至今已发现的miRNA有数百种,在人类基因组中,miRNAs调控大约1/3的蛋白编码基因,控制细胞的凋亡、增殖、分化、代谢以及个体的发育和肿瘤的发生、发展以及耐药。目前,有超过50个miRNAs被发现在前列腺癌中异常表达,包括miR-146a。另外,位于miR-146a前体基因序列上的一个单核苷酸遗传变异(single nucleotide polymorphism, SNP)被发现影响成熟miR-146a的生成和功能。因此,我们推测miR-146a遗传变异可能与前列腺癌的发生发展有关。本研究旨在通过分子流行病学和分子生物学相结合的手段,对miR-146a遗传变异与前列腺癌遗传易感性的关系以及……. 人IRF-3基因启动子的克隆与初步鉴定 目的:克隆人干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF-3)基因启动子并寻找其核心功能区域,鉴定与IRF-3基因启动子结合的转录因子,为阐明其表达调控机制奠定基础。方法:以HEK 293细胞基因组DNA为模板,采用PCR方法获取IRF-3基因5’侧翼序列,测序正确后插入pGL3-Basic载体。运用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定其启动子活性。采用缺失分析法分别从IRF-3基因5’侧翼的5’端逐段缺失,克隆得到不同长度的截短片段,插入pGL3-Basic载体,使用双荧光素酶检测系统定位IRF-3基因启动子核心功能区域,鉴定其启动子活性。利用点突变技术、凝胶迁移实验(EMSA)、染色质免疫沉淀(ChIP)、RNA干扰和基因过表达等实验,分析IRF-3启动子区的转录因子结合位点。 PGE2对肝癌细胞生长与侵袭能力的影响及相关机制的研究 研究背景:前列腺素E2（PGE2）是花生四烯酸代谢产物,国内外研究表明PGE2合成增加与多种肿瘤的生长与扩散有关。PGE2合成关键酶为环加氧酶（cyclooxygenase, COX）,目前已发现三种环加氧酶,其中COX-2主要由某些细胞因子、激素等诱导合成,因而在炎症与肿瘤组织中往往呈高表达。所合成的PGE2主要通过与细胞膜表面的四种EP受体（EP1、EP2、EP3、EP4）结合,激活下游信号转导通路,而发挥生物学调节作用。本实验室前期实验证明肝细胞癌细胞表面同时表达四种EP受体;COX-2过表达或外源性PGE2都有促进肝细胞癌细胞存活、生长的作用;而选择性COX-2抑制剂celecoxib则可抑制肝癌细胞存活,促进细胞凋亡。本课题在此基础上继续探讨PGE2对肝细胞癌细胞生长、粘附与侵袭能力的影响。 microRNA在肾间质纤维化中作用的研究 1.肾小管上皮-间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肾间质纤维化的关键致病机理。目前肾小管EMT的调控机制仍不十分明确。近来微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miRNA)在EMT中的作用备受国内外关注。我们借助miRNA芯片研究单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstraction UUO)大鼠病变侧肾脏miRNA的差异表达,筛选可能与肾小管EMT相关的miRNA。2.观察miR-200家族在转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)诱导的NRK-52E (normal rat kidney epithelial cell)