三叶斑潜蝇实时荧光PCR检测及其地理种源关系的研究.pdf

摘要 本文对欧洲、亚溯、北美等不同地区的三叶斑潜蝇标本群体进行了分子鉴定，并对其 COI区域进行序列测定和分析。根据测定序列设计了三叶斑潜蝇Liriomyza tr咖lii(Burgess) 的特异性探针，建立了应用实时荧光PCR快速鉴定三叶斑潜蝇的方法。根据Genbank及自 测的发生于中国广东与台湾、日本、菲律宾、以色列、德国、美国、墨西哥和洪都拉斯等 地的三叶斑潜蝇及其近缘种mtDNACOl基因部分序列，对差异最大的区域设计了TaqMan 荧光探针，确定了检测条件和参数，建立了实时荧光PCR方法，通过测试的14个不同种 群的昆虫，证明探针的特异性，能有效的区分和鉴定三叶斑潜蝇，建立了快速、高效的检 测鉴定三叶斑潜蝇的实时荧光PCR方法。对三叶斑潜蝇不同虫态个体的检测均有效。 度1500bp的片段，测序其中550 发现各地群体同源性极高，达到100％，进一步证实了种类形态鉴定的准确性。使用PAUP 4．0b10软件进行简约原则下对全世界三叶斑潜蝇根据mtDNA—COI进行系统发育关系分析， 构建系统树，发现中国新发种群与世界各地种群无差异。 关键词：三叶斑潜蝇，mtDNACOl基因，分子鉴定，实时荧光PCR，序列分析 Abstract all of and Liriomyza importantvegetable trifolii(Burgess)(Diptera：Agromyzidae)ispest aroundthe inChinamainlandwasfirst from cut—flower world．Liriomyzatrifolii reported crops of in2006．Weherethatthis has ZhongshanGua／tgdongprovince report pest recentlyexpanded distributionin withahost extensionand its China，along plantrange populationexplosion． on PCRwasestablished Themolecular real—time in Liriomyzatrifolii(Burgess)based identifying [his DNA ofmitochondrialCOIof occurredin paper．Usingpartial sequences L．trifolii andTaiwan in Guangdong provinces and related from Honduras，andspeciesGenbank，the三．trifolii—specificprobe in fromL．sativaeBlanchardis obtainedthesanleresultsindividualsofdifferent designed．It isa andless toothermolec