三叶因子1和醛酮还原酶A1C1相互作用的验证.pdf

三叶因子1与醛酮还原酶A1C1相互作用的验证 研究生：蔡稼燕 导 师：任建林教授 中文摘要 目的：应用筮瘗基远渲友鎏肄证TFFl与候选结合蛋白ARKlCl的相互作用 关系，并通过荧光共聚焦显微镜对TFFl及AKR．1C1进行细胞内共定位，从 而确定TFFl及结合蛋白的相互作用，为进一步明确其结构和功能，为探讨 TFFl在胃肠道肿瘤中发生、转移的内在机制和作用及信号通路提供实验基 础。 方法：应用多聚酶链反应(PCR)技术扩增TFFl序列，定向克隆到 1，western pCMV-NF．kB构建表达TFF1的融合质粒，命名为pCMV-NF．kB．TFF blot法验证AKRlCl基 的融合质粒，命名为pCMV-GAL4．AKRlCI，Western 因在人胚肾细胞293．FT中的表达。pCMV-NF．kB．TFFl与 疫共沉淀，以验证蛋白TFFl和AKRlCl之间的相互作用。其次 聚焦显微镜观察二者在细胞内的定位。 blot法证实转染的293．FT细胞能正确表达NF．kB．TFFI融合蛋白、 体的免疫沉淀物中检测出来，同样在抗NF．kB抗体的免疫沉淀物中也能检测 N蛋白AKmCl。鱼瘗基鐾塞数塑显示二者荧光在细胞内存在部分共定 位，二者的荧光有部分融合。 --_——_--●—-_●_‘’‘‘。’_-‘‘‘-—。_‘一 结论：TFFl与AKRlCl在哺乳细胞内存在某种相互作用，为进一步研究TFFl 的功能及相关机制提供了线索。． 关键词TFFlAKRlCl免疫共沉淀荧光共聚焦蛋白-蛋白相互作用 ’’’rificationontheeinteractionteractionbetweentrefoilfactor andaldo．．ketoreductaseAICl Candidatefor Postgraduate：CaiJiayan Tutor：PenJianlin Abstract OBJECTIVE：TotheinteractionofTFF1withAKRlC1and the analyze observe andcellularlocalizationofTFFlandAKRICI． expression METHODS：砀eeDNA TFFIandAKRIC1was fragments encoding amplified chain wereclonedinto bypolymerasereaction(PCR)method，andsubsequently and vectorand pCMV-ADpCMV-BD 1 and C1wereconstructedandthenthe pCMV-GAL4·-AKRI pCMV-NFkB-·TFF studiesof invivowerecarriedout after binding byCO—immunoprecipitation e1)一transfectionoftheconstructsinto293FTcells．The andsubceUular