α-干扰素对活化的肝星状细胞早期凋亡的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 旷干扰素对活化的肝星状细胞早期凋亡的影响 目 的 肝纤维化(1iverfibrosis)是各种慢性肝病产生的一种病理过程，可视为肝硬 变的早期阶段。在我国慢性乙型肝炎是引起肝纤维化及肝硬化的主要原因。小干 近年来一些学者研究发现洳干扰索还具有一定的不依赖于抗病毒作用而独立存在 的抗肝纤维化的作用，但对其抗肝纤维化的作用机制仍不十分清楚。目前已有研 stellate eell,HSC)凋亡的作用，但对其作 究表明IFN．Q有促进肝星状细胞(Hepatic 用于凋亡的何阶段未见报道。本研究运用四甲基偶氮唑蓝实验(methylthiazolyl tetrazolium。MTT)及应用流式细胞仪(flow 研究在外源性洳干扰素的刺激下，体外培养的活化的大鼠HSC早期凋亡的情况， 进一步认识a．干扰素抗肝纤维化的作用机制，为临床应用提供理论依据。 材料与方法 在本研究中，我们对活化的大鼠HSC进行体外培养，然后分别选取生长状态 良好的不同的三代细胞，接种在96孔板中后，用含IFN．伍浓度分别为0、l×102、 l×103、l×104、l×105 小时后，向各孔加入MTT液50ul继续培养4小时后，弃上清液，加入二甲基亚 的细胞数。 再选取生长状态良好的不同的三代细胞，分别加入含有与上述相同浓度的 4oc离心10分钟，弃上清。加入Iml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮， 1000rpm Buffer,加入 Bmdmg 1000rpm,40C离心10分钟，弃上清。将细胞悬于200ul 10ulAanexinV-FITC和5ulPI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟，加入300ul Binding Buffer，在1小时内应用美国BD公司流式细胞仪进行检测。 应用SPSS11．0统计软件对以上结果进行t检验。 实验结果 洳干扰素对活化的大鼠HSC凋亡影响的研究。 ×105 U，mI的DMEM培养液与活化的大鼠HSC共同培养24小时后，测得各组的 X104、 细胞数随IFN．a的浓度增加而减少。经SPSS软件进行t检验统计学分析，l l×105 U／ml的IFN一旺组与对照组比较有显著性差异，分别为t=2．82和 异。说明IFN-a在浓度为1×104、l×105 U／nil时可使活化的大鼠HSC的数目减 少，表明IFN．a可能有诱导活化的大鼠HSC凋亡的作用。 2．流式细胞仪检测结果：用0、l×102、l×103、l×104及l×105U／ml作 用浓度组的IFN．a作用于体外培养的活化的HSC后，经AnnexinV和PI双染上 流式细胞仪检测结果]FN．11．作用组的右下象限中的红色标记点比对照组的右下象 X X105 限中红色标记点明显增多，并且l 104及l U／ml早期凋亡率分别为 l×105 U／ml两个作用浓度组的早期凋亡率与对照组比较有显著性差异，分别为 HSC的早期凋亡。 2 结 论 1．IFN．a有诱导体外培养的活化大鼠HSC凋亡的作用。 2．IFN．q诱导体外培养的活化大鼠HSC的凋亡主要是作用在凋亡的启始阶段， 即促进体外培养的活化大鼠HSC的早期凋亡。 关键词