以烟草花叶病毒为半抗原载体的活体免疫反应.pdfVIP

第32卷第lO期 应用化学 V01．32Iss．10 CHINESE OFAPPLIEDCHEMISTRY Oct．2015 2015年10月 JOURNAL 庐e≈gN蠕≈2翱 15研究论文!i5 惶乱2写吨多^2写q；o够 以烟草花叶病毒为半抗原载体的活体免疫反应 Amie 霞。 君8 Jittima 园” 王倩¨ 赵 陈利民8 胡 张晓磊6 Luckanagul6林 (4cPI$1科学院长春应用化学研究所长春130022；6南卡罗莱纳大学美国南卡罗莱纳州29208) 摘要以烟草花叶病毒的赖氨酸突变体(TMV．EPMK)为半抗原载体，利用“点击化学”反应，将半抗原小分 原。通过免疫实验发现，以亲水性连接臂制备的TMV-EPMK／E3偶联体可在小鼠体内诱导更高水平的E3特 异性免疫反应，所产生的IgG抗体的滴度达21800。该结果表明，以烟草花叶病毒为载体制备的完全抗原，其 免疫原性受连接臂性质的影响，亲水性的连接臂更有利于抗体反应的发生。 关键词TMV．EPMK；点击化学；半抗原；人工抗原；免疫反应 中图分类号：0636 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2015)10-1107-07 DOI：10．1 16 1944／j．issn．1000-0518．2015．10．1501 许多与疾病相关的特异性分子如低聚糖【1引、多肽∞1及其它化学小分子H1等，虽然能够被抗原特异 性抗体识别，但因其相对分子质量小、免疫原性弱而不能引起有效的活体免疫反应，因此被称为半抗原。 半抗原分子需要连接在具有高免疫原性的蛋白质载体上，形成多价偶联物，才能引起相应的免疫反 子在载体上规则有序的重复排列，能够更加有效地激发淋巴B细胞受体(BCRs)的交联并活化B细胞， 从而增强免疫反应。因此，具有规整结构的多价载体是抗原载体的理想选择。 许多病毒纳米粒子(VNPs)是由多个衣壳蛋白亚单元围绕其遗传物质规则有序地排列而成的规整 纳米结构物质¨1|，其表面可通过基因工程技术融合外源抗原多肽，或通过化学修饰手段偶联多肽或非 肽类的半抗原分子。由于VNPs的衣壳蛋白在三维空间呈现规则有序的排列方式，为在纳米尺度上精确 地排列抗原分子提供了可能性，所以成为理想的抗原载体材料¨2‘。例如，烟草花叶病毒(TMV)、豇豆花 叶病毒(CPMV)和噬菌体Qp、M13等已经被广泛用于人工抗原制备方面的研究悼’13‘151。 在之前的工作中，我们以小分子雌三醇(E3)作为半抗原模型，初步探索了VNPs的形状对于免疫反 在小鼠体内诱导高滴度和高特异性的E3抗体。从结构上来看，E3分子具有较强的疏水性。因此，当将 聚集，从而影响其空间排列的有序性。如果利用亲水性的连接臂进行偶联，可在整体上提高E3分子的 亲水性，因此有可能避免由于强疏水性导致的E3分子之间的相互聚集，使其能够充分地舒展在TMV— EPMK表面并保持一定的取向，从而更加有利于抗原与免疫细胞之间的相互作用，增强免疫反应的效 率。为此，在本论文中我们沿用TMV．EPMK作为抗原载体，在E3分子上分别设计了疏水性 2015-03-25收稿，2015-05-07修回，2015-05-29接受 国家自然科学基金21374119)资助项目 案化与应用 粒子的功能化 万方数据 应用化学 第32卷 EPMK／E3完全抗原，并通过免疫小鼠来研究了连接臂的亲／疏水性对其免疫反应的影响。 1实验部分 1．1试剂和仪器 雌三醇(E3，上海阿拉丁试剂有限公司)，牛血清蛋白(BSA，北京鼎国昌盛生物技术有限公司)，弗