超广谱β-内酰胺酶基因及新SHV型β-内酰胺酶特性的研究.pdfVIP

超广谱B．内酰胺酶基因及新SHV型B一内酰胺酶特性的研究 摘要 头孢菌素和单环B．内酰胺类抗生素的一大类p．内酰胺酶。主要由肺炎克雷伯菌 和大肠埃希菌产生。近年来产ESBLs菌株在临床上的分离率不断增加，已经成 为院内感染的主要病原菌之一。有关ESBLs的研究，尤其是基因水平的研究是 目前国际上临床微生物学晃研究的热点之一。在我国产ESBLs菌株的检出率较 基因方面作了如下研究：收集浙江省8个地区医院和浙江大学医学院附属第一 医院临床分离的362株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，评价ESBLs表型的筛选方 法，鉴定产ESBLs菌株中SHV型酶基因型分布情况，并研究一种新SHV型D． 内酰胺酶的特性。 1．超广谱B．内酰胺酶的检测方法比较及相关基因学研究 disk test，。。T)、E ／目h狰ESBLs表型检测方法有双纸片法(d。uble teSt法、 L 酶抑制剂增强的纸片扩散法和酶抑制剂增强的肉汤稀释法(inhibitor potentiated brothdilution test，IPBDT)，但由于后两种方法的试剂费用贵、购买及操作不便， 而临床微生物学实验室需要一种简便、易行、可靠、经济的ESBLs表型检测方 法。我们采用IPBDT、DDT、E test法、Vitek法检测68株临床分离的大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌、10株标准产酶大肠埃希菌及l株大肠埃希菌ATCC25922 中产ESBLs的情况。以IPBDT检测结果为标准，评价DDT法、Etest法和Vitek test法和Vitek法的特异度均较高，而灵 法的ESBLs检测结果。发现DDT、E test法和Vitek法相比，DDT是 敏度分别为96．4％、70．4％和75．9％，提示与E 检测结果不符合的细菌进行D．内酰胺酶基因分型，发现其中2株细菌产生的是 内酰胺酶，造成表型与基因型检测不符合的原因可能与细菌TEM-1型酶产量高 有关。丫 2．浙江省产超广谱D．内酰胺酶菌株SHV型p-内酰胺酶基因型分布 医学院附属第一医院临床分离的362株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，共筛选出 chain reaction，PCR)和斑 119株产ESBLs菌株。用聚合酶链反应(polymerase 点杂交的方法对其所产ESBLs进行初步分型，其中单独产TEM型和单独产SHV 型8一内酰胺酶的细菌分别占55．5％和10．9％，同时产TEM、SHV型的占13．4％， 产非TEM非SHV型的占20．2％。浙江省内各地区ESBLs基因型流行情况不同。 载体，双脱氧链终止法测定核苷酸序列，序列分析结果在网上查询比对，确定 酰胺酶在产EsBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的主要流行基因型。y／， 3．新型D-内酰胺酶SHV-28的发现及其特性的研究 厂采用PCR方法获得浙江省宁波和舟山地区临床分离的8株表型鉴定为产 ( ESBLs肺炎克雷伯菌所产SHV型p-内酰胺酶的基因，该片段含888个核苷酸， 基因克隆、序列分析结果显示核苷酸及相应的氨基酸序列在GenBank查询无相 将该型基因片段与pET-28b表达型载体连接后转入大肠埃希菌中表达，测定重 组细菌所表达的重组蛋白等电点为7．6；重组细菌酶抑制剂增强的纸片扩散法鉴 定为非产ESBLs细菌；脉冲场凝胶电泳研究发现这8株临床分离株相互之间的 亲缘关系较小，说明产SHV．28型酶菌株有可能是独立发生的，不存在耐药菌 株的克隆传播：接合试验的结果提示SHV-28型B·内酰胺酶基因位于质粒上。 以上研究表明： 1．以IPBDT检测结果为标准，与Etest法和Vitek法相比，DDT是一种简便、 特异、