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本文是自治区高技术发展计划项目
“牛病毒性腹泻/粘膜病检测试剂盒研制
腹泻/粘膜病流行病学调查与灭活疫苗生产种毒筛选(项目
编号:201141147)的部分研究成果
课题主持人:冉多良
(新疆农业大学)
万方数据
牛病毒性腹泻/粘膜病病毒EO、E2基因免疫原性的比较
摘要
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为黄病毒科,瘟病毒属成员,是一种在世界范围内对造成家畜健
康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚
至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与猪瘟病毒和
羊边界病毒在血清学上有交叉反应。目前为止,还没有有效的预防和控制BVDV的措施,因此急需
研制出新型理想的疫苗防制该病。本研究主要包括以下两个部分内容:
上,成功构建了含有牛病毒性腹泻病毒E2基因的真核表达载体pVAXl.E2.通过脂质体介导重组质粒
转染293T细胞,经Westernblot证实E2基因可在293T细胞中表达。随后将重组核酸疫苗肌肉注射
免疫小鼠,检测一免、二免、三免的小鼠血清中和抗体效价,以及三免后的小鼠淋巴细胞增殖情况。
性血清抗体的产生,而E2组效果不明显。MTT检测显示两组均大大促进了特异性淋巴细胞的增殖,
且E2组效果好于E0组。
原核表达宿主菌,用IPTG诱导表达,并确定表达的最佳诱导时间和温度,通过聚丙烯酞胺凝胶电
泳和蛋白印迹分析确定,表达的蛋白能与BVDV阳性血清发生特异性反应。用纯化后的蛋白免疫小
鼠,经ELISA检测和MTT实验,两蛋白组与对照组相比,均产生了显著地的差异,且E2组效果好
于E0组。
关键词;牛病毒性腹泻病毒;E0基因;E2基因;真核表达;原核表达
万方数据
andE2
Thedifferenceof betweenEO gene
immunogenicity
。Bovine,iralovinev diarrhea/mucosaldisease11isea
Abstract
Bovineviraldiarrheavirusisonememberofthe aserious
Flaviviridae,Pestivirus.It’Spathogen
diseasecancause fever,oral
tOthelivestock。healtharoundtheworld.This patienthigh
seriouslyendanger
ofmilk evenoff
andnasalmucosal or oversecretion,reduction
bleedingm.ucus productionproduction,
anomaliesandother has
COW orstillbirth,fetal
ab.ortion symptoms.BVDVserological
pregnant
thereisnocommercialvaccinestO the
cross-reactionswithCSFVandBDV.
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