分子自组装固定DNA和DNA和其他分子的相互作用及其应用.pdf

摘要 (随着人类基因组计划(HGP)的顺利实施，人类基因组的工作草图 、 提前绘制成功，人类在生命科学领域的认知又前进了一大步。然而在知 道基因图谱之后，接下来的问题是面对大量的基因或基因片断序列如何 研究其功能，研究重点便是要搞清楚基因变体的生物学功能及其对生命、 健康和疾病的意义。各种重大疾病的易感基因以及这些基因之间的相互 作用关系，将是研究的重中之重。因而对DNA与其他分子相互作用的基 础研究变得越来越重要。另一方面，利用基因检测来进行基因诊断和基 因治疗迫切需要研制开发各种适用于不同使用环境下的或快速灵敏或高 密度高通量或方便廉价的基因传感器、基因芯片。 要构筑基因传感器、基因芯片(包括光学、电化学和压电传感器 或芯片)，首先必须先将与待测的靶分子碱基序列互补的DNA探针固定 到固体表面上，构筑一个DNA识别层(DNArecognitionlayer)，然后 才能进一步进行根据碱基互补原理通过杂交反应检测其互补片段。DNA 、 探针的固定化是制各基因传感器(芯片)的主要内容之一J ．／ 在本论文工作中，我们提出了使用自组装的聚二烯丙基二甲基氯化 ————…’—…～…～一一…—_。 胺(PDDA)单层膜来固定DNA的新办法，用XPS、红外漫反射、拉曼 和STM技术进行了表征。XPS、红外漫反射光谱、拉曼光谱、STM和 电化学实验均表明DNA可以成功固定化到到PDDA自组装膜上。STM 图像还表明单晶金电极上PDDA自组装膜是呈二维有序的线条状分布， f 随后吸附的DNA可顺着该结构进行固定化，也具有一定的有序性。，该 t 固定化DNA的方法不仅可以用于制备用于电化学DNA传感器，同样也 适用于其他类型的DNA传感器。由于PDDA自组装单层膜具有的一定 的纳米有序性，使得其不仅可以用于制各DNA传感器，还有可能迸一 ．I． 步用于丌发高密度高通量的DNA芯片。) 我们还首先尝试了在金电极上用直接吸附的办法形成聚乙烯亚胺 ／ (PEI)自组装单层，并将其用于DNA的固定化文XPS、红外漫反射和 拉曼光谱实验均证明了PEI在金电极上的自组装，以及DNA在PEI自 组装膜上的吸附。STM图像表明了PEI自组装膜是个表面具有多孔洞的 结构。 通过对两种聚电解质自组装膜固定化DNA的比较，我们发现PEI 自组装膜虽然也不失为一种可行的DNA固定化方法，可应用于DNA传 感器的制备和DNA电化学研究，但是，相对而言，PDDA自组装单层膜 ”、 具有电子传递性能更好、表面更加有序的优点。) ， 在研究聚电解质自组装固定化DNA技术的同时，我们还提出一种 新的采用氧化铝膜板构筑高密度DNA阵列的方法，并用XPS、红外漫 反射、拉曼和AFM技术进行了初步的表征。 ， f我们应用PDDA自组装膜电极研究钴邻菲咯啉配合物[Co(phen)，]3“2+ 、 与电极上吸附的DNA相互作用，分析了[Co(phen)、]3√2+与电极上修饰的 dsDNA和ssDNA不同的相互作用模式，同文献的结果相符合。说明可以使 用PDDA自组装膜电极来研究DNA与其他分子相互作用的电化学行为。根 掘[Co(phen)，、P”+与dsDNA和ssDNA由于不同的相互作用模式，而出现的 不同电化学行为，我们提出一种用以表征DNA分子杂交的电化学标记法， 例如控制合适的电位，通过杂交前后电流的明显变化与否来判断杂交与 否，电化学标记法提供了