含有聚（N异丙基丙烯酰胺共N，N二甲基丙烯酰胺）链段的两亲共聚膦腈胶束载药系统研究.pdf

逝江太差硒土堂盈论室 趱墓 摘 要 实验参考先前合成两亲性聚膦腈接枝共聚物的方法，使用三氯化铝作为催 化剂，聚(二氯代膦腈)通过热开环反应聚合，通过两步亲核取代反应，合成 了以聚膦腈为骨架，聚(N．异丙基丙烯酰胺．共．N，N．二甲基丙烯酰胺)即Poly 物进行结构表征．结合1H．NMR结果测定两亲性接枝聚膦腈最终的亲疏水组成 光散射仪(DLS)和帕尔帖温度控制器研究了该系列共聚物的在水中的自组装情 况．芘荧光探针法测得的共聚物的最低临界胶束浓度(CMC)分别为：0．281， O．178，0．035 比例的增大而降低．粒径测定结果表明，该系列共聚物在水中自组装形成的胶 束粒子粒径呈单分布状态，范围在20．50nm内，帕尔帖温度控制器测定低溶液 相变温度(LCST)显示所有的聚合物的LCST均大于37C． 利用上述合成的两亲性聚膦腈接枝共聚物为聚合物材料，阿霉素为模型药 物，分别采用透析法和O／W乳化法制备阿霉素胶束。实验对透析法和乳化法均 进行了单因素考察．实验结果显示，随着投药量的增加，聚合物载药量也增加， 但是到达一定比例后突然降低．乳化法和透析法制备的胶束均呈现相同的趋势。 此外透析法中初始含水量对载药量及粒径均有较大影响，表现为初始含水量越 高，载药量和包封率越低，但粒径也越小．两种方法制备中载药量和包封率都 与聚合物水溶液浓度有关．实验结合动态光散射仪(DLS)，透射电镜(TEM) 原子力显微镜(AFM)对载药聚合物胶束的形态以及粒径分布进行了考察．结 果显示，载药过程使聚合物胶束的粒径增大，而且随着载药量的增加，粒径增 大明显．载药过程增加了胶束的稳定性，TEM和AFM观察都呈分散较好的球 状胶束． Ⅱ 本课题还对阿霉素聚合物胶束的体外释放特征进行了考察．分别选取不同 pH(5．5，6．5，7．4)的磷酸缓冲盐溶液作为释放介质考察载药胶束在不同pH 环境下的释放特征，并且对不同载药量的胶束体外释放特征进行了考察．结果 表明，载药聚合物胶束在体外的释放具有pH依赖性，表现为较低pH情况下， 聚合物胶束内部的阿霉素快速释放，而且较为完全；随着pH的升高，累积释 放百分率逐渐降低．这是由于在低pH下，内核中疏水性的阿霉素发生解离， 很大程度的提高了溶解度，促进了阿霉素进一步的释放．对于抗肿瘤给药体系， 这种pH敏感特性能够使药物更好地在肿瘤组织释放，发挥肿瘤抑制作用，而 降低对正常细胞跟组织的毒副作用．实验还考察了高低不同载药量的阿霉素聚 5．5下的释放，结果显示48h内低载药量的阿霉素胶 合物胶束在pH7．4和pH 束累积释放百分率较高，而高载药量的阿霉素胶束累积释放较少．不同亲疏水 组成的聚合物材料制备得到的载药胶束体外释放有略微的差别，在pH5．5条件 下，主要表现为：疏水性片段含量较高的PNDGP．3制备得到的阿霉素胶束较 PNDGP．2制备得到的阿霉素胶束释放缓慢． 实验考察了两亲性聚膦腈接枝共聚物对Hela细胞和HepG2细胞生长的影 响，结果表明不同浓度的PNDGP．3与细胞作用24h和48h后均没有表现出细 胞生长抑制，细胞生长率均在90％1iA上．结果表明该系列两亲性接枝共聚物生 物相容性好，对细胞生长没有影响．体外细胞毒性的实验结果表明，经过透析 法将阿霉素包封在聚合物胶束后，阿霉素胶束仍然具有与游离药物阿霉素基本 相当的体外细胞毒性，前者的IC50稍大于后者，这是由于胶束的释药过程缓慢 以及入核时问较长引起的。Hela细胞以及HepG2的细胞毒性实验结果都表明， 游离阿霉素和载药胶束的细胞毒性都随着作用时间的延长而增加，即具有时间 依赖性． 实验利用激光共聚焦显微镜观察了两种肿瘤细胞摄取阿霉素的情况。结果 表明在O．5h时游离阿霉素基本进入细胞核，而两种载药胶束的细胞核的药物浓 度很低，到了4h载药胶束中的CLSM图中药物基本进核，说明胶束的入胞过 程是通过内吞机制． 大鼠体内药动学实验表明胶束能明显延长阿霉素的半衰期，能明显增加 m AUC，具有长循环能力． 关键词：两亲性聚膦腈；聚合物胶束；阿霉素；体外释放；细胞毒性；体 内药动学