枸橼酸钾干预下肾结石大鼠肾组织TammHorsfall蛋白的表达.pdfVIP

浙江大学医学院颂J‘研究生论文 枸橼酸钾干预下肾结石大鼠肾组织 Tamm．Horsfall蛋白的表达 浙江大学医学院 外科学(泌尿外科) 2000级临床医学七年制 卢涝滂 导师 李新德主任医师 中文摘要 目的与背景： 肾结石是泌尿外科常见病、多发病，发病率高，且随着生活水平的提高，其 发病率呈上升趋势。因此肾结石的发生机制和防治研究一直是泌尿外科医师关注 的问题。 近年来国际上的研究发现Tamra．Horsfa[!蛋白(Tamm-HorsfaU protein，THP) 可能是一种抑制尿路结石形成的大分子有机物。但是THP抑制结石形成的机制及 其所起的作用，不同的研究得到不同的结果，存在较大争议。虽然国外有研究者 报道了肾结石大鼠肾脏组织THP表达的结果，但还没有治疗因素干预下肾结石大 鼠肾脏组织THP表达的研究报道。 枸橼酸是研究最早最充分的结石抑制因子之一，但其确切的防石机制，与 其他大分子抑制因子之间的关系还有待于进一步研究。因此，我们研究枸橼酸钾 干预下肾结石大鼠肾组织THP的表达，了解枸橼酸钾干预对肾组织THP表达的影 响，进一步探讨枸橼酸钟抑制结石形成的机制，及枸橼酸钾与THP之间的相互关 系，这不仅为解析肾结石发病机理提供实验依据，对临床寻求肾结石的防治途径 也具有一定的指导意义。 浙江人学医学院颂l：研究生论文 方法： 1、动物和组织准备：选择20只雄性SD大鼠(由浙江大学附属邵逸夫医院动 液为致石剂。先将大鼠正常条件下饲养一周，使其充分适应环境后，随机分成3 组：对照组4只：喂普通净化饮用水；结石组8只，以致石剂代替饮用水；枸橼酸 钾干预组8只，除以致石剂代替饮用水外，同时用25％枸橼酸钾溶液以lml／1009 体重每天灌胃一次。为使三组大鼠实验条件保持一致，结石组和对照组用净化水 以tml／1009体重每天灌胃一次。两周后处死大鼠，解剖取肾脏，肉眼下观察肾脏 表面形态，再沿肾门长轴剖开，部分肾组织用10％甲醛固定，部分组织于解剖显 微镜下观察肾剖面结石形成情况。 2、结石形成观察：先肉眼观察肾脏表面形态，再将剖开的肾脏置于解剖显 微镜下，观察肾剖面结晶结石的形成。以肾脏剖面有无明显结晶沉淀物、游离结 石作为判断有无结石的标准。并根据结晶结石形成的量及肾脏损伤的程度分为四 级，进行统计分析。 3、肾组织THP表达强度测定：采用免疫组织化学法测定肾脏组织THP的相 对表达量，使用sANTA 多克隆抗体及羊抗兔ABC染色系统试剂盒。先将甲醛固定的肾脏组织脱水浸蜡包 埋，3um厚切片，再脱蜡水化后，1％H：02．PBS溶液封闭内生过氧化物酶，1．5％ 生物素化羊抗兔二抗中孵育30分钟，卵白素和生物素化辣根过氧化物酶孵育30 分钟，DAB显色5分钟，再苏木素复染，乙醇二甲苯脱水透明，中性树脂封片。 最后于光学显微镜下观察，按“+++”表示明显染色(深棕黄色)，“++”表 示中度染色(黄色)，“+”表示轻度染色(浅黄色)，进行分级并统计分析。 for 4、数据处理：通过SPSSl3．0 非参数检验对三组大鼠肾脏成石程度和THP表达强度进行统计分析．采用 较。 浙江人学医学院硕。L研究生论史 结果： l、肾脏结石的形成：肉眼观察三组肾脏表面大体形态，对照组大鼠肾脏外 形无明显异常，质地软，未见钙化斑形成；结石组大鼠。肾脏明显肿胀，质地变硬， 肾表面可见大量浅黄色钙化斑，部分钙化斑融合；枸橼酸钾干预组大鼠肾脏稍肿 胀，表面亦可见浅黄色钙化斑，但融合不明显。解剖显微镜下观察，对照组大鼠 肾剖面均无可见的结晶结石沉淀物；结石组大鼠肾剖面嵌有大量的结晶，并可见 游离结石形成；枸橼酸干预组大鼠肾剖面可见少量结晶沉淀，未见游离结石形成。 对三组大鼠成石程度进行分级，采用Kruskal．Walls非参数检验对三组大鼠‘跨脏成 石程度进行统计学分析，三组之间成石程度存在显著差异(P0．01)，采用 Mann．Whitney非参数检验对