海洋弧菌QY105中褐藻胶裂解酶研究.pdf

AlyV5 最适温度为38 ℃，在pH 7.0 的Tris - HCl 缓冲体系中酶活最高。AlyV5 在 60 ℃ 保温 1 h 或 90 ℃ 保温 10 min 后，其剩余酶活可达到原来的40 % 。 AlyV5 在pH 6.0 - 9.0 的缓冲体系中4 ℃存放12 h 后仍保持80 %的酶活力。NaCl + + 对酶活有明显的促进作用，没有NaCl 的反应体系中几乎测不到酶活；K 、Li 、 NH4+对于酶的活性无明显影响；Mg2+ 、Ca2+ 、Mn2+对酶活有促进作用，Cu2+ 、Fe3+ 对于该酶的活性有明显的抑制作用；其余金属离子对 AlyV5 的酶活力有不同程 度的抑制作用；而1 mM 的SDS 对于酶活的影响不大，EDTA 却明显抑制AlyV5 的酶活力。 在底物特异性研究中，AlyV5 对 polyG 具有偏好性，但同时也可以降解 polyM ，并且降解polyG 的终产物主要为二、三、四糖，而降解polyM 最终产物 主要为三、四、五糖。因此，AlyV5 所能降解的最小寡糖为 polyG 的五糖单元 及polyM 的六糖单元。将其与polyM 偏好性褐藻胶裂解酶混合使用，测得的酶 活比混合后的理论值高出2 倍。 为了进一步研究褐藻胶的代谢过程，在研究了褐藻胶裂解酶 AlyV5 的性质 后，我们对其内部的褐藻胶寡糖酶进行了克隆，通过简并 PCR 及 SiteFinding-PCR ，得到了三个褐藻胶寡糖酶的全基因序列，通过序列比对分析后， 我们发现这三种褐藻胶寡糖酶在弧菌中具有高度保守性。 这些酶的发现，将加快利用褐藻胶生产生物乙醇的进程，为解决能源危机提 供新的思路。 关键词：生物乙醇；褐藻胶裂解酶；褐藻胶寡糖酶；褐藻 2 Research on alginate lyase from marine Vibrio sp. QY105 Abstract With the growing demand for resources, caused the drying up of earths energy sources, the governments pay attentions to the development and utilization of new energy. Biomass energy has attracted much attention in these new energy. Brown algae exhibit several key features of an ideal feedstock for production of biofuels and renewable commodity chemical compounds. Requiring no arable land, fertilizer, or fresh water resources. Large-scale cultivation is practiced in several countries, yielding 15 million metric tons per year, Rong Cheng yielding 1 million metric tons (wet weight) per year, which affords abundant raw materials. Alginates are acidic heteropolysaccharides consisting of β-D-mannuronate (M) and i