第四章(1节).pptVIP

* 第四章 载体的选择与构建 主要内容 1.细菌质粒载体 2.噬菌体载体 3.酵母细胞载体及大容量载体 4.动、植物载体 基因工程载体： 携带外源目的基因或DNA片段进入宿主细胞进行复制和表达的工具。 ★ ★ 载体的一般特性： 在宿主中能自我复制或借助宿主染色体进行复制 容易从宿主细胞中分离纯化 具有容纳外源DNA分子的能力 有限制性内切酶位点，便于基因组装 有对载体进行筛选的标记或报告基因 1.1 质粒的定义 质粒是染杂色体外能进行自主复制的遗传单位，由J.莱德伯格在1952年提出。 共生生物、真核生物的细胞器DNA和细菌染色体以外的单纯的DNA分子 某些既能独立地存在于细胞质中又能整合在染色体上的质粒称为附加体。酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。  1. 质粒载体 1.2 质粒的分类 1.2.1 按照复制性质： 严紧型质粒:带有与分配有关的基因，由DNA聚合酶Ⅲ复制，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，1～2个/细胞； 松弛型质粒:由DNA聚合酶Ⅰ复制，当染色体复制停止后仍然能继续复制，数十～数百个/细胞 一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关，例如某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型，而在变形杆菌内则属松弛型。 ★ ★ ★ 1.2.2 按照构型： 环形双链DNA分子