《NU7026对肝癌细胞放射增敏作用及机制研究.》.pdf

第 31卷 第 6期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vo1．31，No．6 2013年 12月 J．Radiat．Res．Radiat．Process． December2013 NU7026对肝癌 细胞放射增敏作 用及机制研究 黄 波 龙 颖 唐 艳 肖方竹 让蔚清 周平坤 (南华大学公共卫生学院 衡阳 421001) 摘要 为给研制新的抗癌和放射增敏药物提供理论依据，采用Westernblot检测DNA—PKcs在肝癌细胞中的表 达水平及NU7026对 DNA—PKcs活性的影响，以彗星实验表达检测细胞 DNA受损的情况，微核实验观察染 色体损伤，克隆形成实验观察对细胞株放射敏感性的影响。结果表明，DNA．PKcs在肝癌细胞中呈高表达， NU7026能抑制辐射所诱发的p-DNA—PKcs／S2056的活化，微核实验及彗星实验检测表明，NU7026能有效延 长辐照后细胞的修复时问，并能明显降低放射后细胞的克隆形成率。提示 NU7026对肝癌细胞有放射增敏作 用，其作用机制与抑制DNA．PKcs活性有关。 关键词 NU7026，放射增敏，DNA．PKcs，DNA修复 中图分类号 R735．7，TL71 肝癌是危害居 民生命健康的前 3位最主要恶性 v 射 线 辐 照 前 加入 终 浓 度 为 20gmolL·叫 的 肿瘤之--[。约 70％一80％的肝癌患者需要接受放射 NU7026)。 治疗。肝癌恶性程度高，易转移、复发，手术切除 将辐照后 12h的3组细胞常规消化后，吹打分 的病人 中约 50％会出现复发或远处转移L2J。提高肿 散成单个细胞，0．075molL·1KC1液低渗离心，以 瘤对放射治疗的敏感性，提高其治疗效果，成为肿 甲醇 ：冰醋酸=3：1固定 30min，离心，弃上清， 瘤放射治疗研究领域 中的重点。本工作主要研究 加入少许固定液，混匀细胞，滴2-3滴于玻片上， NU7026对人肝癌细胞HepG2增殖、DNA．PKcs表 自然晾干，吉姆萨染色 5—30min，冲洗后晾干，镜 达及细胞辐射敏感性的影响，为该化合物开发成为 检。 一 种有效的抗癌和辐射增敏药物提供理论依据 。 1．3 WesternBlot检测DNA．PKcs蛋 白表达 1 材料与方法 将指数生长的LO2和 HepG2用 PBS洗涤两 次，常规消化细胞，离心后收集细胞 (约 1×10。) 1．1 材料 于 1．5mLEP管中，加入 100gL蛋 白裂解液室温裂 肝癌细胞 (HepG2)~ll正常肝细胞 (LO2)由本 解 8min后，13000rm·in 离心 10min，收集上清 实验 室 保 存 ，在 含 10％胎 牛 血 清 的 DMEM 于 1．5mLEP管中，一70℃保存备用。 (Dulbecco’Smodifiedeaglemedium，Gibco公司) Westernblot检测 DNA．PKcs蛋 白表达 ，用 培养液中 37℃、5％CO2培养箱中培养。NU7026 J3-actin作为 内参 。具体步骤：按每样本每孔 100 g (C17H15NO3，吗啡啉类物质 ，Sigma公司)、 总蛋 白量上样 ，5％SDS．PAGE凝胶 电泳 ，80V恒 DNA—PKcs抗体 (SantaCruz公司)、DNA．PKcs 压转膜 3h，室温TBST洗膜 5min，以含 5％脱脂 (pS2056)(Abcam 公司1、H2AX (Ser139)(CST 奶粉的TBST室温封 闭lh，TBST洗膜 5min重复 公