考马氏法测定蛋白质含量.ppt

目的 1、掌握考马斯亮蓝法测蛋白质含量的基本原理及优缺点。 2、掌握标准曲线的制作方法。 考马斯亮蓝法 Bradford 1976年由Bradford建立的考马斯亮蓝法,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法之一. Bradford 法和 Lowry 法灵敏度高，比紫外吸收法高10-20倍 原 理 1、考马斯亮蓝G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料最大吸收峰位置,由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕红色变为蓝色.染料主要是与蛋白质中碱性氨基酸和芳香氨基酸残基结合. 2、在595nm下测定的吸光度A595,与蛋白质 浓度成正比. Bradford 法的突出特点: (1)灵敏度高. 其最低检测蛋白质含量可达1ug/ml,这是因为蛋白质与染料相结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的吸光系数 ?,因而光吸收要比Folin –酚试剂法大得多 (2)测定快速,简洁, 只需要加一种试剂.完成一个样品的测定,只要5分钟左右 .由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好. (3).干扰物质少 一些阳离子如K+、Mg+、Na+和硫酸铵等不干扰测定。 干扰物质：去污剂