体外诱导人成体骨髓间充质干细胞恶性转化的实验的研究.pdf

体外诱导人成体骨髓间充质干细胞恶性转化的实验研究 中文摘要 第一部分体外诱导人成体骨髓间充质干细胞恶性转化 目的：通过体外诱导的方法观察人骨髓间充质干细胞(MSCs) 体外恶性转化的可能。 月以上，形成转化后的骨髓间充质干细胞(transformedmesenchymal blot法检测TMCs和MSCs端粒酶和c．myc的含量。 成TMCs，其形态具备了恶性肿瘤细胞的特点。流式细胞技术检测 MSCs与TMCs表面标记物，发现TMCsCDl3和CDl05的阳性表达 显增加，表明TMCs较MSCs有更强的增殖能力。Westernblot检测 TMCs 性转化。 关键词： 骨髓间充质干细胞，恶性转化，GM．CSF，IL．4 体外诱导人成体骨髓间充质干细胞恶性转化的实验研究 第二部分转化后骨髓间充质干细胞成瘤的体内实验 目的：通过动物实验检测转化后的骨髓间充质干细胞(TMCs)能否 在动物体内形成肿瘤，从而验证MSCs发生了恶性转化。 对照组分别将2．5×105 PBS。在第3、7、14、21 NOD／SCID小鼠体内，空白组注射2009l 和25d每组分别处死裸小鼠各3只。取出肺脏，称重，并计数转移结 节。将肺脏标本切片行HE染色和免疫组化检查。 经皮下注射实验：将18只6周龄雄性BALB／C．nu裸小鼠分为 对照组分别将2．5×105 PBS。第25d BALB／C裸小鼠前臂内侧皮下，空白对照组注射200},d 处死小鼠，取出皮下肿瘤病灶测量大小并称重。肿瘤标本切片行HE 染色和免疫组化检查。 结果：尾静脉注射时发现第7dTMCs组开始出现肺部转移结节，第 14d开始所有裸鼠均发生肺部转移。MSCs对照组和空白对照组均没 差别没有统计学意义。而21d、25d时TMCs组鼠肺湿重明显增加。 HE染色肿瘤细胞排列紊乱，核大小、形状和染色不一，并可见多核、 异型核等，具备了恶性肿瘤细胞的特点。免疫组化结果肺部转移灶中 体外诱导人成体骨髓间充质干细胞恶性转化的实验研究 鼠肺细胞的CDl33阳性率明显增加。皮下注射组所有TMCs组12～ 16d均在裸鼠皮下形成肿瘤，体积为3．02 4-0．83cm3，重量1．37士0．169； 而对照组均未形成肿瘤结节。皮下肿瘤组织免疫组化结果显示 VIM(+)，DES(+)，SMA(+)，CDl33(+)，CD34(+)，sloo(+)， 源恶性肿瘤，同时显示TMCs具有干细胞特性，能向不同种类细胞分 化。 结论：TMCs为恶性肿瘤细胞，无论通过尾静脉注射或皮下种植均 能在裸鼠体内形成肿瘤。MSCs不能在裸鼠体内形成肿瘤。 关键词：骨髓间充质干细胞，恶性转化，肿瘤类型，分化 体外诱导人成体骨髓问充质干细胞恶性转化的实验研究 第三部分siRNA抑制hTEIH基因表达对转化后骨髓间充质 干细胞的影响 目的：探讨小干扰RNA(siRNA)抑制端粒酶逆转录酶(human telomerasereverse 细胞(TMCs)增殖和在动物体内成瘤能力的影响。 方法： 构建针对人hTERT的siRNA，通过脂质体转染的方法将 hTERT 物体内成瘤能力的变化。 结果：通过western 的端粒酶蛋白含量逐渐减少，与siRNA的浓度呈负相关，50nmol／L、 hTERT-siRNA 意义。流式细胞仪检测50nmol／L、lOOnmol／L、200nmol／L 7 体外诱导人成体骨髓间充质干细胞恶性转化的实验研究 组相比差别均有统计学意义。RT-PCR检测结果显示50nmol／L、 100nmol／L、200nmol／L 1 了1 较晚，为17．3d。对照组形成的皮下肿瘤体积和重量分别为2．56cm3 义。 酶的含量，也降低了端粒酶的活性，从而增加了TMCs的凋亡、抑制 了TMCs的生长，