前体及其诱导子对石蒜不定芽的生长和生物碱积累的影响.pdf

摘 要 本试验主要研究了石蒜野外材料鳞茎、叶、根、花、花葶与组织培养材料不 定芽、组培根、愈伤组织生物碱含量的差异，优化了石蒜不定芽液体培养的条件， 建立了石蒜不定芽液体震荡培养体系，研究了前体化合物和诱导子及二者协同作 用对石蒜不定芽生长和生物碱积累的影响；研究了在不同的培养时间添加前体和 诱导子对石蒜不定芽生长和生物碱积累的影响。获得以下试验结果： 1. 石蒜组织生物碱分析。试验结果表明石蒜碱、力可拉敏、加兰他敏三种 生物碱含量高低顺序在石蒜不同组织中不一致，石蒜碱含量从高到低依次为：花 鳞茎花葶 叶根不定芽组培根愈伤组织；力可拉敏含量从高到低依次为： 花鳞茎 叶花葶根不定芽组培根愈伤组织；加兰他敏含量从高到低为：花 叶根不定芽鳞茎花葶组培根愈伤组织。不定芽中三种生物碱含量高于愈 伤组织和组培根，加兰他敏含量为 230.197 μg•g-1 DW ，仅低于花，叶和根，是愈 伤组织中加兰他敏含量的 21.79 倍。由于石蒜花期较短，因此花不宜用作研究材 料；且与叶、根和愈伤相比，石蒜不定芽具有容易诱导，容易培养，不受季节限 制的特点，因此石蒜不定芽是研究生物碱合成最适宜的试验材料。并用气质联用 技术从石蒜鳞茎样品中鉴定出 5 个生物碱成分，分别为石蒜碱、力可拉敏、加 兰他敏、多花水仙碱、普鲁维因。 2. 石蒜不定芽的液体培养。试验结果表明培养基形态、激素配比、蔗糖浓 度、光照时间影响石蒜不定芽的生长和石蒜碱，力可拉敏，加兰他敏三种生物碱 的积累。有利于石蒜不定芽生物碱积累的最佳培养条件分别为：液体培养、6-BA 和 NAA 浓度分别为 2 mg•L-1 和 0.2 mg•L-1 、蔗糖浓度为40 g•L-1 、光照时间为 16 -1 h•d 。 3. 前体化合物对石蒜不定芽的影响。试验结果表明酪胺对石蒜不定芽的生 长和石蒜碱、力可拉敏、加兰他敏含量的影响不一致。添加高浓度酪胺有利于石 蒜生物碱的积累，低浓度的酪胺促进石蒜不定芽的生长。综合酪胺对石蒜不定芽 的生长和生物碱含量的影响，酪胺浓度为250 μmol•L-1 时石蒜碱，力可拉敏，加 兰他敏的含量增加最为明显。原儿茶醛对石蒜不定芽的生长和三种生物碱积累的 影响一致。低浓度的原儿茶醛能够促进石蒜不定芽的生长，且有利于石蒜生物碱 的积累。原儿茶醛浓度为 50 μmol•L-1 时石蒜不定芽生长最快，干物质积累最多， 生物碱的含量增加最为明显。 I 4. 诱导子对石蒜不定芽的影响。 试验结果表明低浓度的水杨酸既能够促进石蒜不定芽的生长又有利于石蒜 生物碱的积累。水杨酸浓度为 50 μmol•L-1 时，石蒜不定芽生长最快，干物质积 累量最大；而水杨酸浓度为 10 μmol•L-1 石蒜生物碱含量增加最为明显，综合水 杨酸对石蒜不定芽生长及生物碱积累的影响，能使石蒜生物碱产量显著增加的水 -1 杨酸浓度为 10 μmol•L 。 试验结果表明添加茉莉酸甲酯组的石蒜不定芽 GI 和 ADB 均低于对照组； 而当茉莉酸甲酯浓度≤200 μmol•L-1 时均能促进石蒜碱，力可拉敏，加兰他敏的积 累。综合茉莉酸甲酯对石蒜不定芽生长和石蒜生物碱的影响，MeJA 浓度为 100 μmol•L-1 时石蒜碱含量低于对照，力可拉敏和加兰他敏的含量与对照并无明显差 异。可见单独添加茉莉酸甲酯不能明显提高石蒜碱，力可拉敏和加兰他敏的含量。 5. 诱导子与前体协同作用对石蒜不定芽的影响 试验结果表明水杨酸、酪胺和原儿茶醛联合添加有利于石蒜不定芽的生长， 促进了石蒜不定芽生物碱的积累。酪胺与原儿茶醛浓度为 150 μmol•L-1 时，不定 芽的 GI 和 ADB 分别是对照的 119%，115%；石蒜碱，力可拉敏，加兰他敏三种 生物碱含量均达最高，分别是对照的 302%，320%，388% 。 试验结果表明茉莉酸甲酯、酪胺和原儿茶醛联合添加对石蒜不定芽生长和生 物碱含量的影响与单独添加茉莉酸甲酯不同。添加适宜浓度的茉莉酸甲酯、酪胺 和原儿茶醛能够促进石蒜不定芽的生长和干物质的积累，但是添加组的石蒜不定 芽中石蒜碱，力可拉敏和加兰他敏含量均低于对照组，且对生物碱合成的抑制作 用强于对石蒜不定芽生长的促进作用。因此，