禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法的建立.pdf

IHI{illNllllmlllHfllltllBllllllI 摘要 Y2143893 近年来鸡淋巴白血病(AL)一直危害着我国的养鸡业，已成为影响我国蛋鸡业 的第一大疫病。由于常规实验室检测方法费时费力，进口ELISA试剂盒价格高昂且 准确率并不理想，所以急需一种快速、灵敏、准确、高通量的检测方法来预防和控制 亚群的基因芯片分型和检测方法。 因突变区，两端选取其保守区域，设计合成三个亚群的通用上游引物1条，以及B、 E亚群的通用下游引物和J亚群下游引物各l条，将上述引物用Cy3标记，建立多重 PCR体系；参考目的序列内部的三个亚群各自的保守区域，选择亚群之间基因突变 位点多的区域，设计5条寡核苷酸探针，合成过程中在每条探针的5’端先加入若干 个碱基T’使探针长度达到35ma左右，再进行氨基化修饰，将合成好的探针点制在醛 基化玻璃基片上，制作寡核苷酸探针基因检测芯片；以寄主细胞DFol中提取传代ALV Cv3标记的PCR扩增产物，与基因芯片进行杂交反应，扫描结果。对基因芯片进行 特异性、灵敏度实验，并对50份临床样品进行检测。 经杂交反应后，芯片能够准确检测并分型三个亚群的参考毒株，其检测灵敏度能 够达到102个基因拷贝，能够同时检测到三个亚群参考毒株的多重PCR产物，且与 禽类常见的四种病毒均无交叉反应。对临床样品检测的结果与ELISA抗体检测结果 相比符合率高。本研究结果证明，基因芯片技术是一种有效地对ALV的B、E和J 亚群进行检测和分型的方法，且具有较高的特异性和灵敏度，为今后在临床应用中快 速鉴别诊断ALV等免疫抑制病提供可行性。 关键词：禽白血病病毒：亚群；基因芯片；多重PCR；寡核苷酸 avianleucosisvirus ofa forthedetectionof subgroups genechipassay Development andJ B，E Author：Yue Zhang andBiochemical Major：MicrobialPharmacy Advisor：Prof．Jiaxin Wang；BingYang Abstract in has been recent Avian harmingpoultryhusbandryyears，and Lcukosis(AL)has inour thecommon athefirst diseaseof chicken become industry egg country．Since big timeand the ELISAkitwas methods waste imported expensive， oflaboratory energy，and for an