三种抗菌药物诱发大肠杆菌释放游离内毒素研究.pdfVIP

中文摘要 前 言 革兰氏阴性杆菌(GNB)感染的治疗包括两个致死因素的消 失:’菌血症和毒血症。尽管各种抗菌药物在体外对GNB表现了 较高的抗菌活性，但感染引起的患病率和死亡率仍然很高。这 可以归于几种原因:GNB对抗菌药物耐药性的急骤增加;一些 抗菌药物不能穿入深部组织，达到有效杀菌组织浓度;对一些 慢生长细菌抗菌药物也不易穿透其外膜;对于生长和溶解后的 菌体，抗菌药物有诱导GNB释放游离内毒素(FLPS)进入血液中 的倾向。抗菌药物亦能导致肠道中的GNB释放其富含的大量 FLPS，透过受到破坏的肠道粘膜屏障，引起局部或全身的内毒 素血症。上述情况可能就是引起GNB重症感染病死率高居不下 的原因之一。 实脸材料 大肠杆菌(ATCC25922)由中国医学细菌保藏管理中心提 供。头抱它V(CeftazidimeCTZ)、美洛培南(MeropenemMEP)化 学对照品，中国药品生物制品检定所提供;亚胺培南(Imipenem IMP)，美国MerckSharpDohme公司提供。鳖试仪专用堂试 剂、细菌内毒素检查用水，湛江海洋生物制品厂;细菌内毒素 工作标准品，中国药品生物制品检定所。0.2011m微孔滤器为 Minisart公司出品。BET-32细菌内毒素测定仪，天津大学无线 电厂制造。 实脸方法 1最低抑，浓度(MIQ翻定 测定CTZ,IMP,MEP对大肠杆 菌(ATCC25922)的MIC(mg/L)分别为:0.5,0.5,10 2 除热原处理 所有试验用玻璃器皿清洗干净后，用锡箔纸分 包于250℃烘烤2小时。 3曹落计数 取0.Iml含细菌的肉汤培养物，做10倍连续稀 ~ .~一 一 一 — 一 ， 释至含菌量为1XIOlcfulml，分别取0.lml均匀涂布在血琼脂上， 35℃培养1618小时，以可计数最小稀释度统计菌落。 4 FLPS诱导实毅 分别向4只5m1细菌量为10cfulml肉汤试 管中加入抗菌药物，使其抗菌药物浓度为0.5XNIIC,1XMIC, 2XWC,5XMIC，设不含抗菌药物的对照管及不含细菌和抗 菌药物的空白管。置35℃振荡培养，分别于0小时、1小时、2 小时、4小时、6小时、12小时取lml用0.201微孔滤器除去 膜结合型内毒素(BPLPS),滤液中含游离内毒素((FLPS)o 5FLPS侧定 系列稀释滤液，在BET-32细菌内毒素测定仪 上定量检测滤液中FLPS含量。 6菌体形杏观察 离心肉汤培养物，取沉淀涂片复红染色，光 镜下观察菌体形态变化。 7 统计学处理 FLPS诱导实验及FLPS测定重复做三次，数 据以x士SD表示，行t检验或方差分析。 实毅结果 1不同时间三种杭宙药物对大肠杆蔺产生FLPS的形晌 抗菌药 物作用4,6,12小时，诱导大肠杆菌产生FLPS的量由多到少， 依次为CTZ,IMP和MEP;培养4小时后，CTZ低浓度诱导高 量FLPS，高浓度诱导低量FLPS产生;不加抗菌药物的对照培 养物滤液中也有一定量FLPS，但从培养2小时后均低于有抗菌 药物各培养物滤液中的FLPS量。 2菌落计数 MEP和IMP在1XMIC,2XMIC,5XNIIC浓度， 作用大肠杆菌2小时后，培养液中活菌计数为0，具有快速杀 菌效果;而CTZ在 0.5XMIC,1XMIC,2XMIC时，作用大 肠杆菌 12小时仍有 103cfulrnl以上的细菌存活，仅在 5XMIC 浓度，作用大肠杆菌4小时后开始杀菌，杀菌速度较缓慢的。 3细蔺形态观察 在光学显微镜下观察，CTZ使菌体由小杆状 变为大量长丝状，但在5XNIIC浓度作用4小时后残留极少量 长丝状菌体，并呈溶解状;IMP和MEP使菌体保持原有的杆状 形态或使菌体呈球杆状。 讨 论 CTZ能与GNB胞壁中的PBP-3结合抑制了细菌分裂过程 中的隔膜形成，使其变成丝状(拉长而未分开)，用CTZ各浓度 处理大肠杆菌后都出现杆状变为长丝状的现象。而IMP和MEP 结合 PBP-2，使菌体胞壁缺失，细菌不形成丝状体，菌体呈