超微粉腧穴敷贴对变应性鼻炎大鼠Th细胞亚群的调控.pdf

槲… 、卿鼎 超微粉腧穴敷贴对变应性鼻炎大鼠Th细胞 亚群的调控 博士研究生：陈静 指导老师：王升旭教授 摘要 研究目的：腧穴敷贴治疗变应性鼻炎因其在临床的广泛应用及确切的疗效， 相关的效应及机制探讨已成为近年的研究热点，并取得了一定的研究成果。根 据腧穴敷贴治疗变应性鼻炎计量学和Meta分析的结果发现，既往的研究虽然肯 定了其临床疗效，但高质量的文献很少。机理研究有涉及AR发病机制中nl细 胞亚群Tlll／Th2的失衡关系，但并不深入，缺乏对近年免疫研究热点nl细胞另 外两个亚群，Treg细胞和Tlll7的相关研究。目前临床使用的腧穴敷贴药物为中 药散剂，存在药粉颗粒大小不一，很难混合均匀，透皮吸收率低，影响贴敷效 果的问题。因此，本研究拟从两个方面进行：一是采用细胞破壁，生物利用率 高，能充分混匀且利于吸收的中药超微粉来进行腧穴敷贴，选取大椎、肺俞、 肾俞穴治疗变应性鼻炎大鼠并观察其疗效；二是探寻超微粉治疗AR的可能机 制，尤其是在既往研究的基础上深入探讨超微粉腧穴敷贴治疗对AR大鼠nll、 Th2、Treg和11117细胞亚群的可能影响，以及细胞亚群之间的相互作用。 方法：造模与分组：全部56只SD大鼠，雄性28只，雌性28只，2月龄。 雌雄分笼喂养。按随机数字表原则分成两组：正常对照组10只(雄5，雌5)；造 模组46只(雄23，雌23)。适应性喂养3天后，造模组46只大鼠予卵清蛋白10mg 作为基础致敏。第15天开始加强免疫，予5％OVA50ul喷鼻／(侧·日)和l％ OVA喷雾吸入5min，连续7天。3周后，造模组46只大鼠中，有6只死于造模 摘要 过程中(雄2只，雌4只)，考虑为腹腔注射误注入大肠所致。剩余40只大鼠 在末次激发后30min观察大鼠搔鼻、喷嚏、鼻溢等行为，并采用叠加计分法进 行行为学评分，所有大鼠评分均超过5分，显示本组造模全部成功。将造模成 功的AR模型大鼠再按随机数字表原则随机分为4组：模型组10只(雄6只，雌 4只)；丙酸氟替卡松喷鼻剂组10只(雄5只，雌5只)；普通粉组10只(雄5只， 雌5只)；超微粉组10只(雄5只，雌5只)。以上5组50只大鼠进入下一步实 验。 穴位定位：大鼠大椎、肺俞、肾俞定位参考《常用实验动物穴位定位》。大 椎位于第7颈椎与第1胸椎间，背部正中。肺俞位于第3胸椎下两旁肋间。肾 俞位于第2腰椎下两旁。 普通粉以及超微粉的制备：普通粉、超微粉均选用符合《中华人民共和国 药典》(2005版)中药饮片炮制规范，中药广州致信中药饮片有限公司生产，批号 为080710。①普通粉：白芥子粉、延胡索粉、细辛粉、生甘遂粉，按照2：2： 1：1的比例配置；②超微粉：将按比例配置好的普通粉由广东省第二中医院药 剂科使用微粉机，振动电机功率为1．5FW，加工15分钟，粉碎成粒径范围0．1～ 751-Lm，粒度分布中心D5昭10～15岬，达300目以上的超微粉。 实验措施：①正常对照组：不采取任何处理措施；②模型组：给予生理盐 水滴鼻，每日1次x10天；③丙酸氟替卡松组：丙酸氟替卡松鼻喷雾剂喷鼻，每 日1次，每次50州侧×lO天；④普通粉组：首先进行备皮，将按比例配置好的 次性纸胶布固定于穴位，再使用一次性透气孔胶布缠绕1．2圈以加固药贴。每次 贴药4hxl0天；⑤超微粉组：贴敷药物改为超微粉，方法同上。 实验观察指标与检测： ①行为学观察：于末次治疗后30min观察大鼠搔鼻、喷嚏、鼻溢等行为的 变化。记分方法：鼻痒：轻度搔痒1．2次为1分，剧烈搔痒抓鼻四周2分。喷嚏： 1．3个为1分，4．10个为2分；11个以上为3分。清涕：流至鼻孔为1分，超出 n 博士学位论文 前鼻孔为2分，涕流满面为3分。采用叠加计分法。 ②鼻黏膜组织HE染色及嗜酸性粒细胞计数观察：将各组大鼠于末次相关处 理后，在10％水合氯醛，3ml／kg麻醉后，断头处死大鼠，迅速剥除上颌骨部皮 肤，将上颌骨从颅骨中分离出来，打开鼻背，沿鼻中线切开，暴露鼻中隔和双 侧鼻腔，分离鼻中隔与