滇南边境地区虫媒病毒调查的研究.pdf

大理学院硕}论文 滇南边境地区虫媒病毒调查研究 研究生：周涛 导 师：张海林教授梁国栋教授 中文摘要 研究目的 一106011·47”之间，北回归线横贯本省南部。云南省西部和西南部与缅甸接壤， 南部与越南、老挝毗邻，是我国毗邻周边国家最多、边境线最长的省区之一。云 南地势西北高东南低，海拔高差异常悬殊，最高为6740米，最低仅76．4米。 地域辽阔、自然条件复杂、垂直气候明显。夏季，阴雨天气多，适于各类宿主动 物、吸血节肢动物的生存繁殖和某些虫媒病毒的存在及传播，而且梁国栋、张海 林等已经在云南省分离到乙型脑炎病毒、登革热病毒、基孔肯雅(cmrd病毒、 virus)[1-6J，并且在蚊虫活动高峰的时 辛德毕斯病毒、巴泰病毒、版纳病毒(banna 候，当地同时存在病因不明的发热和病毒性脑炎患者，提示当地存在其它虫媒病 毒性疾病的可能性。加之旅游和边境贸易的往来频繁。因此，对滇南边境地区进 行虫媒病毒病原学的调查，全面了解当地存在和循环的虫媒病毒种类与分布情 况，对于研究我国云南的虫媒病毒生物学及分子生物学特征、预防和控制当地虫 媒病毒病等均具有重要意义。 本课题对滇南部分边境地区进行虫媒病毒调查，于2006年8月在禄丰县、 勐海县、景洪市；2007年9月份在文山、河口和麻栗坡县共6个地区采集蚊虫 标本并进行虫媒病毒的分离鉴定。 2 大理学院硕士论文 勐海县、景洪市：2007年9月份在文山、河口和麻栗坡县共6个地区采集蚊虫 标本并进行虫媒病毒的分离鉴定。 研究内容 标本采集 于2006、2007年8-9月在云南省的勐海县、禄丰县、景洪市、 麻栗坡县、河口县、文山县6市县共10个采集点，夜间在人房和畜圈(舍)采 集蚊虫标本，分类后按蚊种进行分装，立即冻存于液氮中直至用于病毒分离。两 53只。一本次采集蚊虫标本分类可见，云南省蚊虫仍然以三带喙库蚊为当地优势 蚊种。 研究方法 首先把采集到的蚊虫标本(191批)全部研磨，采用组织细胞 培养的方法分离病毒，将蚊虫研磨处理后的离心上清接种C6／36细胞，再用病变 C6／36细胞上清接种BHK一2l细胞，最后通过形态学、血清学、分子生物学方法 鉴定。 结果 共获得15株可引起细胞规律病变的分离物，有10株分离自三带喙 库蚊，3株分离自伊蚊，其他2株分离自按蚊。最后鉴定结果为版纳病毒(Banna virus，BAV)1株，淡色库蚊浓核病毒(Culexpallens pipiens 5株、还有9株分离物需要进一步鉴定。 版纳病毒(BAV)：从三带喙库蚊中分离到1株BAV，通过测定这个分离 株第12片段编码区序列，结果显示BAV可分为两个进化群，即印度尼西亚和 中国，显示了病毒在地域分布上的差异。但是，新分离WS0704．2与来自辽宁 同，位于一条独立的进化枝中，说明该地区分布的BAV在进化上相对独立。 浓核病毒(DNV)：从三带喙库蚊、按蚊两种蚊种中分离到5株DNV。DNV 是一种昆虫病毒，该病毒通常对节肢动物宿主有一定致病性。在我国辽宁、云南、 新疆和贵州省的淡色库蚊、三带喙库蚊、致倦库蚊、中华按蚊等蚊虫中均分离到 3 大理学院硕l：论文 型的CPE效应，而并不在哺乳动物细胞中增殖和产生病变(尽管在自然界中 CppDNV很好的适应了其蚊虫宿主)。 研究意义及创新性首次在我国滇南边境地区蚊虫种类及虫媒病毒调 查，了解了滇南边境地区蚊虫种类和分布特征；从蚊虫标本中分离到了BAV、 DNV共2种虫媒病毒，不但丰富了我国云南省滇南边境虫媒病毒的种类，而且 为了解当地传染病病因及病毒性传染病的预防控制提供了极为重要的基础数据， 将产生极大的社会效益。 本研究中分离的BAV是首次在文山分离到，该病毒属于Seadoma病毒属3 个成员中的一种病毒(BAy)，说明该区域是双链RNA病毒