番茄果实成熟过程中三个乙烯受体基因表达研究.pdfVIP

摘要 乙烯作为影响果实采后生理的重要因子，同时又是控制果实成熟衰老的关键所在， 所以一直是人们采后研究的一项重要内容。但目前果实成熟过程中乙烯的调控机制远未 搞清楚，深入研究果实成熟衰老期间的基因表达的生理影响及其规律，对全面认识和了 解果实成熟衰老变化规律并在实际上加以利用是非常重要的。乙烯的生物合成途径已在 上一世纪70年代建立，并对这一过程的调控机理作了大量的研究，采用反义RNA技术 等手段控制果实的成熟已成为现实。近年来，在模式植物拟南芥菜中建立了乙烯信号转 导的初步轮廓，但在果蔬成熟衰老研究的模式材料番茄中，乙烯信号转导的研究还不够深 入。p 本研究测定了普通番茄果实和转反义Acs番茄果实盛花后不同时期的乙烯释放、呼 吸强度、色素含量、PG酶活、果实硬度等生理指标，结果表明两者在采后生理方面存在 显著差异，转反义Acs番茄果实成熟明显推迟，必需用外源乙烯处理才能正常成熟。 根据现己报道的乙烯受体基因序列．在同源性差的区域设计特异引物，采用反转录一 体基因目的片段，回收并纯化目的片段后，将其克隆于pGEM-T easy载体，测序结果表 明克隆序列与报道序列完全一致，而与番茄中其它乙烯受体基因同源性较低。 采用Nonhem杂交的方法对乙烯受体基因(三绷，、z葩刀w，^w)在普通番茄和 乙烯生成缺陷的转反义Acs番茄果实的表达情况进行了较系统的研究．潞果表明乙烯受 体基因在两种不同类型的果实中的表达存在很大的差异：上P￡zR』在不同时期的普通番茄 果实中基本是组成型低水平表达，三P占豫4在番茄果实中高水平表达，且果实的中柱和辐 射壁的￡P￡豫4表达水平一直明显高于果实的外果皮。在转反义Acs番茄果实中￡PE7w』 和￡擅豫4表达明显弱化，外源乙烯处理可促进转反义Acs番茄果实中￡把zR，和 ￡PE豫4基因的表达；NR在普通番茄果实中的表达严格受果实发育的调控，NR在转反 义Acs番茄果实的前期表达较弱，后期表达明显增强，外源乙烯可诱导转反义Acs番 茄果实中．~=R基因的表达。MR在两种类型番茄的花中表达无明显差异。通过乙烯受体基 因表达及果实生理的差异，探讨了基因的表达与乙烯和番茄果实成熟生理之间的关系。 关键词：乙烯受体，基因)表达．N。rthem杂交，番茄 III Abstract an mleinvarious and Ethylene，whichplays importantregulatory physiological as ofthe as hasbeenstudieda contenI fmit—peningt major developmental planf，such process jnthe mechanismof of ethylenedu“ngripening postharvestphysiolog弘Howeve‘regulatory fmitshaS understood．1tisc州calthat eventsand nolbeen fulIy physiologicaIgeneexpression be wecanunderslafldthemechaJlismof and shouldstudied that extensively，so