细菌生化反应.ppt

* * 无凝集 结果 阳性 阴性 有明显颗粒样凝集而盐水对照无凝集 玻片法 试管法 阳性 阴性 试验管和阳性对照管出现明显凝胶块而阴性对照管不凝固 观察到24小时仍无凝固发生 多数致病性葡萄球菌30~60min出现明显凝固 少数菌株（中间型葡萄球菌）凝固力较弱，需孵育较长时间才可出现阳性。 注意 CAMP试验 各种酶类试验 B群链球菌能产生CAMP因子 可促进葡萄球菌β溶血毒素的活性 在两菌的交界处溶血力加强 出现矢形溶血区 原理 在BAP上用金葡菌划种一横线 将被测菌作垂直划线 两线不能相交，距离0.3-1cm 35℃孵育过夜 同时应设阴阳性对照 方法 无箭头样溶血区出现 结果 阳性 阴性 两划线交界处出现箭头样溶血区 本试验所用血液不同而结果会有差异 以羊血或牛血为宜 用无菌盐水洗涤三次的羊红细胞效果更好 所用基础培养基以胰酶肉汤琼脂较好 注意 胆汁溶菌酶试验 各种酶类试验 胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌 细菌发生自溶，菌落消失。 原理 试剂 10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁 方法 平板法 可疑菌落上加10%去氧胆酸钠一环，于35 ℃15~30min观察结果 。 试管法 被测菌培养物0.9ml+10%去氧胆酸钠0.1ml，35℃水浴10-30min观察结果。 可疑菌落仍存在 结果 阳性 阴性 可疑菌落消失 平板法 试管法 阳性 阴性 培养液由浊变清，对照管仍混浊 培养液浊度无变化 O/129试验 抑菌试验 O/129 二胺基二异丙基喋啶 可抑制弧菌属，出现抑菌环 对气单胞菌属无抑制作用，无抑菌环。 原理 含0.5%NaCL的M-H琼脂 同纸片法药敏接种被检菌株贴10 μg、150 μg两种含量纸片 35℃培养18 小时，观察有无抑菌环 培养基 方法 结果判定 抑菌环 结果 150μg/片 10μg/片 有 有 S 有 无 S/R 无 无 R 杆菌肽试验 抑菌试验 杆菌肽可抑制A群链球菌生长 原理 BAP 培养基 方法 结果 挑取被检菌落密涂布于BAP 贴0.04U/片杆菌肽纸片 35 ℃培养过夜，量取抑菌环直径 ＞10mm ＜10mm 敏感 耐药 Optchin（奥普托欣）试验 抑菌试验 肺炎链球菌对Optochin(乙基氢化羟基奎 宁）敏感，出现抑菌环 其他链球菌耐药 本试验较胆汁溶菌试验更有价值 原理 培养基 方法 挑取被检菌落密涂布于BAP 贴5ug/片Optochin纸片 烛缸35℃培养18h，量取抑菌环直径 结果 抑菌环直径＞14mm ≤14mm耐药 加做胆汁溶菌试验证实 敏感 耐药 BAP 氢氧化钾拉丝试验 革兰阴性细菌细胞壁在稀碱溶液中破裂 释放出未断裂的DNA螺旋 使菌悬液呈现粘性而拉出粘丝 原理 取40g/L氢氧化钾溶液1滴于洁净玻片上 取新鲜菌落少许，与氢氧化钾溶液搅拌混匀 并每隔几秒钟上提接种环 观察能否拉出粘丝 方法 结果 阳性 拉出粘丝 阴性 无丝状物形成 仍为混悬液 革兰阴性菌 革兰阳性菌 革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别 大多数革兰阴性菌于5~10s内出现阳性反应， 不动杆菌、莫拉菌反应较慢，60s内出现阳性。 革兰阳性菌在60s以后仍为阴性 应用 培养物 ＞48h 假阳性 溶液 陈旧 假阴性 KOH 溶液与菌落比例适当 菌悬液太稀、菌落太少 注意事项 假阴性 新鲜 万古霉素敏感试验 大多数革兰阴性菌对万古霉素耐药 革兰阳性菌对万古霉素敏感 可借此进行两者的鉴别 原理 被检菌接种于M-H 琼脂平板 万古霉素纸片贴于平板表面 35℃ 培养18~24 小时观察结果 培养基及纸片 M-H 琼脂，5μg/片万古霉素纸片 方法 万古霉素敏感试验 结果 敏感 耐药 有抑菌环 无抑菌环 革兰阴性菌 革兰阳性菌 * * 马尿酸钠试剂：1% 马尿酸钠水溶液 茚三酮试剂：3.5g 茚三酮溶于100ml 丙酮、丁醇混合液(1:1) 中 试剂 0.4ml 被检菌液加1% 马尿酸钠水溶液 混合后，35℃培养2小时 加入0.2 ml茚三酮试剂 振摇，观察颜色变化 方法 无颜色改变 结果 阳性 阴性 出现紫色 触酶试验 各种酶类试验 细菌具有过氧化氢酶 可分解过氧化氢为水和氧 产生气泡 原理 3%过氧化氢溶液 试剂 挑取固体培养基菌落 置于洁净玻片上 滴加3%过氧化氢1~2滴 静置，观察结果。 方法 无气泡产生 结果 阳性 阴性 1min内产生大量气泡 氧化酶试验 各种酶类试验 某些细菌具有氧化酶 可使细胞色素C氧化 氧化型细胞色素C可氧化对苯二胺 生成醌类化合物呈现颜色反应 原理 1%盐酸四甲基对苯二胺水溶液 1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液 试剂 纸片制作 事先剪好适当大小新华定性滤纸