谷胱甘肽发酵代谢调控及其动力学研究.pdfVIP

llIIIIIIIIl 119 to ADissertationSubmitted Shaanxi ofScienceand University Technology for of inPartialFulfillmentofthe the Degree Requirement Masterof Engineering 一 一 PANYa-lei By Dissertation Xiao—-xian Supervisor：HE May,2010 L 谷胱甘肽发酵代谢调控及动力学的研究 摘要 氨酸缩合而成的三肽化合物。GSH是一种广泛存在于动、植物和微生物细 胞中的具有重要生理活性的活性三肽，在蛋白质和DNA的合成、物质的运 输、酶的活性、新陈代谢及细胞的保护等方面具有直接或间接作用。GSH 主要在医药和食品两大领域具有广泛用途。GSH的生产方法主要有溶剂萃 取法、化学合成法、酶转化法和发酵法。目前国内关于GSH的研究主要集 中在菌种选育、培养基和发酵条件优化、分离提取和在临床应用上，而关 于发酵生产谷胱甘肽的代谢调控和动力学研究则较少。 (1)研究了在不同发酵阶段添加不同浓度的前体氨基酸对酿酒酵母YF 左右)的L．谷氨酸、L一半胱氨酸和甘氨酸三种前体氨基酸对酿酒酵母突变株 YF的细胞生长都会有促进作用，但浓度大于4mmol／L时则呈现抑制作用。 L．半胱氨酸对酿酒酵母突变株YF发酵生产GSH影响最大，L．谷氨酸影响次 之，甘氨酸影响最小。经正交实验优化后，添加混合前体氨基酸可以显著提 高谷胱甘肽浓度。 的影响。结果表明在稳定期添加3mmol／L的非前体氨基酸，对酿酒酵母突 变株YF的细胞干重基本无影响。除L．丝氨酸、L．苏氨酸、L．赖氨酸、L． 丙氨酸和L．甲硫氨酸这五种氨基酸可以促进谷胱甘肽合成外，其它氨基酸 使谷胱甘肽浓度达到142．68mg／L，比空白对照增大了66．8％。 (3)通过破碎酵母细胞后向反应液中加入前体氨基酸和ATP的方法， 研究抑制谷胱甘肽合成相关酶活性的因素。结果显示：谷胱甘肽浓度在 13mmol／L以上时，谷胱甘肽对GSHI抑制作用明显。同时ADP与ATP的 比对GSHI和GSHII两种酶都有影响，趋势为ADP与ATP的比越大，对 GSH I和GSHII的抑制作用越大。 (4)使用Design 5L发酵罐中谷胱甘肽生物合成的三个主要因素，响应面分析法表明这三个 因素最佳水平值为：搅拌转速1 Originpr08．0软件对分批发酵的菌体干重、谷胱甘肽浓度和发酵液中糖浓度 实验值进行拟合，得到细胞生长动力学模型、产物生成动力学模型和基质 消耗动力学模型。模型分析和实验验证结果表明该模型拟合效果好，具有 较高的稳定性。 (5)研究了5L发酵罐中分批补加葡萄糖生产GSH的条件，结果表 明补料分批发酵至33h时GSH浓度达到72．49mg／L，细胞干重达到 料分批发酵阶段细胞生长动力学模型、产物生成动力学模型和基质消耗动 和实验验证模型的效果较好。 关键词：谷胱甘肽；发酵；代谢调控；动力学