超支化聚砜胺作为细胞内输送载体的实验的分析.pdf

超支化聚砜胺作为细胞内输送载体的实验研究 摘要 超支化聚砜胺(PSA)是一种新颖的纳米材料，能够简单一步合 成并具有三维立体高度支化结构和末端丰富的氨基功能基团。本课题 的目的是通过研究PSA生物相容性、细胞对其内吞作用和在小鼠体内 的生物分布，以探讨PSA作为载体将药物等生物活性分子进行体内输 送的可行性。 采用A。+船’。单体共聚法制备PSA，通过MTT法比较不同孵育时间 对多种细胞的生物相容性，并与第四代树状大分子聚酰胺一胺 聚合物与细胞孵育后，在不同时间点通过激光共聚焦荧光显微镜 (CLSM)分别检测在37℃和4℃孵育条件下细胞对聚合物的内吞作用 并作比较；通过流式细胞术(FACS)量化聚合物进入细胞的效率；以 细胞器特异的荧光染料处理细胞后，CLSM观察在不同时间点 以纳米金颗粒标记后给予细胞，制作标本后于透射电镜下观察纳米颗 粒在细胞内的分布；利用小动物活体分子成像系统研究正常Balb／c 裸鼠尾静脉注射PSA—FITC后的聚合物的生物分布，并进行量化；为 进一步研究PSA作为药物输送载体的可行性，将PSA共价连接化疗药 物甲氨喋呤(MTX)及配体叶酸(FA)以达到靶向于肿瘤细胞表面表 达的叶酸受体。 -18．5士7．6mV，其生物相容性良好，与细胞孵育72h后细胞半抑制 浓度1mg／mL；细胞摄入PSA—FITC高效快速，且具有时间依赖性； h 在4。C的孵育条件下亦能进入细胞；CLSM及TEM均观察到于孵育3 后线粒体中有PSA-FITC的聚集，于12h则转而聚集至高尔基体；在 NMR 正常小鼠体内，PSA在各主要脏器或组织中无明显特异性浓聚；1H 显示PSA与MTX及FA能够有效连接；细胞实验证明载药系统具有叶 酸靶向性和药物细胞毒性。 一 一般认为，阴离子聚合物由于与细胞膜的负电荷静电相斥而无法 穿膜或入胞效率低下。本课题研究发现，生理环境pH条件下可呈负 电性的超支化聚合物——超支化聚砜胺具备高效细胞内转运特点并 有良好的生物相容性。由于其表面携带丰富氨基功能基团，容易改性， 作为载体通过连接配体或抗体，于肿瘤主动靶向治疗领域具有广阔的 应用前景。 关键词：超支化聚砜胺，细胞内输送，载药系统，叶酸靶向，细胞毒 性 0FHYPERBRANCHED INVESTIGATION ANINTRACELLULAR POLY(SULFONE—AMINE)AS INVITR0ANDINVIV0 DELIVERYSYSTEM ABSTRACT a novelclassof poly(sulfone—amine)(PSA)is Hyperbranched invitro of biocompatibility hyperbranchedpolymer．The performance theresultsshownonotableeffecton of PSAisdescribedand bioactivity a KBand3T3cell va