普那霉素定性定量的分析方法的研究.pdf

中文摘要 普那霉素定性定量分析方法的研究 摘 要 青霉素的发现及其应用标志着抗生素时代的到来，开创 了用抗生素治疗疾病的新纪元，抗生素为人类健康做出了重 大贡献，随着它的广泛应用，细菌耐药性逐年增加，迫切需 要新的抗生素抵抗这些耐药菌株的感染，研究开发抗耐药菌 抗生素已经成为最迫切的任务。 有效的解决途径。它属于链阳性菌素类抗生素，是由Mancy 杀菌活性，主要用于治疗由包括耐药菌在内的革兰氏阳性菌 引起的感染。 I) 普那霉素由两类化学性质不同的物质普那霉素I(PN II)组成，‘普那霉素I为环六肽内酯，普那 和普那霉素II(PN 霉素II为多不饱和环内酯。两者联合使用的体外抗菌活性至 少是单一组分活性的lO倍，这种协同作用同时也扩大了两 组分的抗菌谱，使之对细菌表现为杀菌作用，而各组分单独 使用则表现为抑菌作用。同时，由于存在两种结构完全不同 的组分，该类抗生素耐药性获得较缓慢。这是该新药区别于 其他抗耐药菌药物的显著特点之一，另外它是唯一的口服给 药抗耐药菌药物。国内有关普那霉素的报道较少，为了使其 国产化，填补国内空白，研究开发普那霉素对解决当前耐药 菌感染这一重大问题具有重要的意义。 中文摘要 目的：对普那霉素的各种分析方法进行研究，建立高效 液相色谱法和高效毛细管电泳法，并对其进行定量分析；建 立液质联用法(LC．MS)对普那霉素进行定性分析。 方法：1．高效液相色谱法。(1)色谱条件的选择：通过选 择流动相的组成及配比、流速及柱温，确定最佳的色谱分离 条件。(2)系统适用性试验：在已确定的高效液相色谱条件 下，以组分普那霉素IA和普那霉素IIA分别考察系统理论板 数，并考察普那霉素IA和普那霉素IIA的分离度。(3)专属 性试验：在合适的条件下，对普那霉素样品进行热、碱、酸、 氧化、光、湿的破坏。通过分析被破坏的样品，测定方法的 专属性。(4)精密度试验：取一份对照品溶液，重复进样6 次，记录峰面积，计算峰面积的RSD值。(5)稳定性试验： 取普那霉素供试品溶液适量，室温下放置，分别于O、2、4、 6、8、12小时，取样注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰 面积的RSD值。(6)线性与范围：配制一系列浓度的普那 霉素对照品溶液，测定峰面积；以浓度为横坐标，以相应的 峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。(7)检测限的确定：将普 那霉素对照品溶液逐步稀释，使峰高为噪音峰高的3倍，此 时对应的普那霉素的量即为最低检测限。(8)样品测定：对 三批普那霉素样品按照已确定的色谱分离条件进行测定。2． 高效毛细管电泳法。(1)通过缓冲液浓度及pH、温度及电 压的优化，选择最佳的高效毛细管电泳分离条件，对建立的 方法进行方法学验证。(2)系统适用性试验：在已确定的高 效毛细管电泳条件下，以组分普那霉素I A A和普那霉素II 分别考察系统理论板数。(3)专属性试验：在合适的条件下， 对普那霉素样品进行酸、碱、氧化破坏。通过分析被破坏的 中文摘要 样品，测定方法的专属性。(4)精密度试验：取一份对照品 溶液，重复进样6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD值。 (5)检测限的确定：将普那霉素对照品溶液逐步稀释，测 量最高噪音峰的峰高，使样品峰高为噪音峰高的3倍，此时 对应的普那霉素的量即为最低检测限。(6)样品测定：对三 批普那霉素样品按照已确定的分离条件进行测定。3．液质联 用法。采用高效液相色谱．电喷雾．四极杆质谱仪，通过液相 色谱条件和质谱参数的优化选择，建立分析普那霉素的方 法，确定主要组分和有关物质，最终建立LC．MS法确定主 要组分和有关物质与HPLC组分的对应关系。 性试验：理论板数按普那霉素I 11，按普那霉