《5-氟尿苷的微生物转化》.pdf

42卷l|锕 微 生 物 学 报 V·，l 42 、o I 2002年2月 Sinka }ebma丌2∞2 Ac衄^f缸mb如如g缸n 5．氟尿苷的微生物转化。 阮期平周长林++窭 洁 吴梧桐 (巾国药科大学生物制约学院南京2l0009) 关键词：5一氟履苷．微生物转化，分离纯化 中图分类号“一525 文献标识码：A 文章编号：O(】0l一62(19(2002)01．0117，04 5．双屎苷【简称FLR)足抗肿瘤核苷药物脱氧氟尿苷(noxundme，简称I)儿JRj的合成r{，l可体。脱氧氟 旅廿是种抗代谢垮抗肿瘤药，在体内可以部分转化为氟屎嘧啶(简称FL)．二者具有相似的作Hj途径 和抗肿瘤谱，与}L相比，由十DruR的抗肿瘤活性高且毒副反应小．主要Hj于治疗晚期结直肠蛔和备 种类型肝癌。在国内，采用化学法合成的DFI：R业已进入临床研究阶段“ 采用化学合成}￡生产DFLR时，由于反应过程中需将碱基或棱糖残基的部分基团进行保护．ff『】且产 物为多种核苷肄构1车和其它副产品的混合物，需要进·步分离．因此耗时费力、收率很低(约lO％) 1980年．n雌awa等{r次报道r一种比化学方法更为简单、迅速的酶合成法。。这种方法主要是利用某 些微生物中存在棱什磷酸化酶…。它能催化一种核甘的碱基与另一种碱基互换，牛成新的核甘。近年 来．这种方法已血用于抗病毒药物的合成“7。本文苗次报道利用产气肠杆菌突变株EAM—zl为酶源酶 法合成DFUR的中E】体5一氟尿苷。此项研究可望为抗病毒和抗肿瘤药物的合成提供新途径。 l材料年口方法 1．1材料 1．1．1菌种：产气詹J杆菌(Em哪缸c灯种r哪惴)突变株EAM—zl，由本实验室终诱t玺筛选。 1．1．2试剂：标准品．尿苷、5一氟尿嘧啶，屎嘧啶、5一氟联甘为美国sigma公司产品；尿苷为上海太平洋阜物 高科技有限公司产品；5．氟尿嘧啶为南通第二制药厂产品；柱层层析辟胶G-60为-I，囤青岛海洋化丁集团 产品；高教层析硅胶板(GF_254)为浙江四青牛化厂产品；其它试剂均为国产分析纯。 1．1．3仪器：日本空津sPDloA高教液相色谱仪；美国Beckman公司J2．Hs冷冻高速离心机：梅特勒-托 320．s 利多Deha nH计；8823A．紫外检测仪为北京新技术应用研究所产品；752一G分光光度计为f海第一二 分析仪器厂产品， 1．2方法 1．2．1湿菌体制备产气肠杆菌接种于含蛋白脒109、牛肉浸膏109、酵母谩青5E、Nacl59定容至1l的 DIl70的培养基中，：．15℃恒温培养18，24h，培养液于4℃、8000r／mIn离心15而n，10【n【叫l／L磷酸缓冲液 (pH70)洗涤、离心}}湿莆体。 Hcl终止厦府， (口1178)中(菌体浓雎为lO％)．于60℃的水浴振荡器中恒温振荡反应8～16h，用3…l，I ’前国家医药管理局资助项目 作者简介：阮期f 1961)．髟，副教授．中国药科大学生物制药学皖博上研究生，主整从事舟千乍物半研究．已发 表学术睦文}奈篇 ‘‘通信联系人 收稿日期：2001．0411．幡回日期：2‘)【)1．08．14 万方数据 做 牛 物 学 报 4二卷 离心(8000一㈨n．10…)得上清液。 啦柱I【c=2 5…×80rm)，用洗脱系统I(=氯甲烷：甲醇：水=6l13：1)洗脱。收集棱苷部竹．浓缩后过 硅胶柱Ⅱ【c=2．5…80cm)。用洗脱系统Ⅱ(乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=123：3：2)洗脱，收集氟碌苷部 分．经精制、结晶，得白色晶体样品． 1．2．4TcI法：≤定：将样品溶液点样十GF254硅胶板(10cm×10cmJr．分：次展开(