《KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化的促进作用》.pdfVIP

·586· ·胰腺疾病· KAP一1对胰腺癌细胞Capan一2上皮细胞 问质转化的促进作用 孙诚谊江建新潘耀振詹磊 【摘要】 目的研究KAP．1对胰腺癌细胞Capan．2上皮细胞间质转化(EMT)的调节作用。方法构 载体)、阴性对照组(转染空载体)以及空白对照组1(含10％小牛血清的1640培养基)；而后再将实验组 Capan一2细胞分为抑制剂组(转染化学合成的miR一100-5p抑制剂)、空载体对照组(转染无关序列micro— RNAs抑制剂)、空白对照组2(含10％小牛血清的1640培养基)。用双酶切及测序鉴定慢病毒并计算病毒 滴度。LV—plenti—GFP—KAP一1慢病毒载体稳定转染至Capan-2细胞后，观察细胞的形态学改变。应用实时 mRNA的表达情况。应用Westernblot法 定量PCR检测各组细胞中KAP一1、EMT标志蛋白以及miR一100-5p 检测各组细胞中KAP．1、EMT标志蛋白表达水平。计量资料采用元±s表示，组间比较均采用方差分析。 TU／ml。慢病毒载体转染Capan-2 结果成功构建LV．plenti．GFP．KAP．1慢病毒载体，病毒滴度为2×108 细胞48h后，实验组细胞与对照组比较其形态有明显间质样改变。实验组、阴性对照组、空白对照组1细 胞中各目标蛋白mRNA的相对表达量：KAP一1分别为1．774-0．83、5．034-0．29、5．134-1．14，N一钙黏蛋白分 别为2．62±0．71、5．07±1．53、5．81±1．49，波形蛋白分别为2．504-0．21、3．83±0．57、4．92±0．90，E·钙黏 4-0．40、7．014-0．96、6．87±0．35， 蛋白分别为7．20±1．17、7．83±0．78、3．07±0．36，miR一100—5p分别为1．81 3组比较，差异有统计学意义(F=5．99，7．62，7．88，6．62，4．64，P0．05)。抑制剂组、空载体对照组、空白 对照组2细胞中KAP一1mRNA的相对表达量分别为1．56±0．42、4．894-0．61、5．20±0．38，3组比较，差异 4- 4-1．37、3．44±0．94、3．08 有统计学意义(F=5．14，P0．05)；波形蛋白mRNA的相对表达量分别为3．10 1．16，3组比较，差异无统计学意义(F=0．49，P0．05)。Westernblot检测结果表明：实验组、阴性对照组、 空白对照组1细胞中各目标蛋白的相对表达量：KAP一1蛋白分别为2．77±1．99、0．83±0．46、0．71±0．26， 4- N-钙黏蛋白分别为1．31±0．38、0．41±0．37、0．08±0．04，波形蛋白分别为4．254-0．63、1．03±0．33、1．37 4-0．06、1．17 0．92，E一钙黏蛋白分别为0．62 4-0．45、3．04±0．65，3组比较，差异有统计学意义(F=5．54， 4．68，3．19，8．18，P0．05)。抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP一1蛋白的相对表达量分 别为2．27±0．71、0．56±0．43、0．61±0．39，3组比较，差异有统计学意义(F=4．81，P0．05)；波形蛋白分 别为3．19±0．55、3．93 4-0．06、3．61±0．73，3组比较，差异无统计学意义(F=0．04，P0．05)。结论 EMT。 KAP．1转录因子通过特异性调控其下游miR一100—5p表达，从而促进人类胰